胞冷凍保存方法:選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。(參考:5×105至5×106cells/ml)。3.取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量,置于離心管中,離心收集培養(yǎng)細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min)。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻,制成細胞混合液。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時,可將完全凍結(jié)的凍存管(放入-80℃冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐。清洗細胞,充分洗凈殘留凍存液。寧波正規(guī)無血清細胞凍存液直銷價
細胞凍存:就凍存細胞而言,為了防止細胞在溫度下降時產(chǎn)生胞內(nèi)細微冰晶,其溫度的下降不能太快。標準的操作是每一分鐘下降一度。有以下三種建議:(1)優(yōu)先推薦使用程控降溫儀。(2)其次,加有異丙醇的細胞凍存盒,基本上也可以保證每分鐘1℃左右的降溫速度;(3)還有一些普遍的簡易凍存方法。如4℃半小時,-20℃半小時,然后-80℃過夜,再放入液氮;用泡沫盒(裝15mL離心管的那種)加一個保鮮袋,直接放在-80℃凍存;也可以用紗布做成袋子,將細胞懸掛在液氮上方,隔天轉(zhuǎn)入液氮;在凍存管外面包上棉花,直接放在-80℃冰箱就能夠達到緩慢降溫的效果;有的時候如果確實比較緊急的話,向96孔凍存盒的內(nèi)部加滿自來水,再將凍存管放置孔中,直接置于-80℃,這樣也能夠達到緩慢降溫的目的。合肥武漢無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能:既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。
無血清細胞凍存液,通用于各種動物細胞株。特別配方具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含動物來源性蛋白,能減少各類細菌、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。高安全性,完全使用醫(yī)藥品等級原料進行生產(chǎn),不含動物成分,細菌、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。2.細胞存活率高,無批次差異。3.完全凍存液配方,可直接使用,方便簡捷,可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經(jīng)過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)。無血清細胞,無血清干細胞及MSC凍存液儲存于4℃以下。質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,為期3年。3個月以上沒有使用凍存液計劃時,盡可能冷凍保存。為避免重復凍融過程可能導致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,推薦將100ml產(chǎn)品分裝小瓶后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。
無血清細胞凍存液通用于各種動物細胞株(tumour細胞和常規(guī)細胞),大部分的干細胞,凍存細胞可在-80℃長期保存。不含動物源性蛋白,不含血清成分,可有效減少各類細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分,提高細胞存活率和活力,亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。產(chǎn)品優(yōu)勢:1、無需程序性降溫,可直接將細胞置于-80℃凍存,凍存液無需稀釋。2、細胞可于-80℃長期保存。3、凍存液不含血清等,較大降低細胞污染的可能性。保存方法:冰袋運輸,4℃保存,保質(zhì)期一年。將分裝好的細胞凍存管,直接置于-80 度冰箱過夜保存。
細胞凍存注意事項:1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存,但為對數(shù)生長期細胞。在凍存前一日換一次培養(yǎng)液;2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍壞;3、凍存和復蘇用新配制的培養(yǎng)液。4、取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項特別重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致炸列。凍存液產(chǎn)品針對細胞凍存的特殊配方,能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷,有效提高細胞復蘇率和活力。無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能:細胞凍存是細胞實驗中的一個常規(guī)技術。合肥武漢無血清細胞凍存液
根據(jù)密度調(diào)整細胞凍存 液用量。寧波正規(guī)無血清細胞凍存液直銷價
細胞凍存液的操作步驟:1.配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的凍存細胞培養(yǎng)液;2.取對數(shù)成長期的體細胞,除去舊細胞培養(yǎng)液,用PBS清理。3.除去PBS,添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長發(fā)育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm,5min;5.除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液,用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱,記數(shù),調(diào)整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml~1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中,每管1~1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字,凍存時間及作業(yè)者;8.凍存:標準的凍存程序流程為減溫速度-1~-2℃/min;當溫度達-25℃下列時,可升至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可快速滲入液態(tài)氮中。寧波正規(guī)無血清細胞凍存液直銷價