RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織、簡(jiǎn)單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡(jiǎn)單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成在實(shí)際RNA提取中,有幾個(gè)提取原則:保證RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性。廈門RNA提取試劑哪家好
RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次。實(shí)際上,任何提取實(shí)驗(yàn),都會(huì)在純度和得率這一對(duì)矛盾中取舍。醇沉淀會(huì)將脂溶性雜質(zhì)去掉,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會(huì)連同RNA一起被沉淀下來。因此,多整幾次,并不會(huì)讓RNA的純度翻倍,反而還會(huì)有降低得率的風(fēng)險(xiǎn)。一般情況下,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低,那就只能放棄純度,在低溫沉淀數(shù)小時(shí),以換來較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水,以滅活RNase。這一點(diǎn)是要肯定的。不過,在使用DEPC的過程中,又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水,會(huì)有一股“香甜”的味道。許多人會(huì)以為那是殘留的DEPC而不敢用。實(shí)際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。上海正規(guī)RNA提取試劑進(jìn)貨價(jià)rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所。
新型土壤總RNA快速提取試劑盒:獨(dú)特裂解劑/裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,然后RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于玻璃奶,然后將粗純化的玻璃奶轉(zhuǎn)移到離心柱,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點(diǎn):離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。兼容性強(qiáng),適用于各種不同的土壤、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟??焖?,簡(jiǎn)捷,單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成。多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9以上,可直接用于PCR,Northern-blot和各種酶切反應(yīng)
RNA提取注意事項(xiàng):1、組織樣本要盡可能的新鮮,避免反復(fù)凍融。2、提取時(shí)組織要充分研磨,組織量不宜過少,更不宜過多。3、加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時(shí)間,使樣本充分裂解。4、在用Trizol法提取時(shí),分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸,不能多吸”,千萬不能提取到中間層,否則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染。5、洗滌時(shí)洗滌液應(yīng)充分浸潤(rùn)到管壁的四周,確保洗滌徹底。6、柱式提取法,洗滌完后除了對(duì)柱子進(jìn)行空離后,還應(yīng)當(dāng)將吸附柱置于超凈臺(tái)內(nèi)吹風(fēng)5~10min,使有機(jī)溶劑充分揮發(fā)干。7、柱式法較后洗脫時(shí)候,當(dāng)加入DEPC水后還應(yīng)孵育3~5min,或者提前將DEPC水加熱至60℃,可提高洗脫得率。傳統(tǒng)的Trizol裂解異丙醇沉淀法較后RNA是用DEPC水溶解沉淀,則應(yīng)當(dāng)給予適當(dāng)溶解時(shí)間,并用泵頭不斷吹吸離心管底部。異硫氰酸胍屬于解偶劑,是一類強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑,可溶解蛋白質(zhì)。
RNA提取關(guān)鍵點(diǎn):RNA的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題,較佳方法是保證樣品完全裂解,但相同的裂解方案換了一個(gè)樣本可能就沒轍了。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配,或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K、溶菌酶等)。BIOG血液RNA快速提取試劑盒是公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)在綜合比較了國(guó)外同類較好產(chǎn)品的基礎(chǔ)上反復(fù)研制優(yōu)化而成,專門用于血液RNA的快速提取純化。本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液配方,可直接從新鮮、冷凍或陳舊的全血中提取高質(zhì)量的RNA,操作簡(jiǎn)便快速,只需15分鐘即可完成血液RNA提取。RNA提取得率較高,可在200μL全血中提取5μg左右RNA。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜,裂解液和洗脫液經(jīng)過多次優(yōu)化,有效地去除了蛋白、色素、脂類等雜質(zhì)污染,特別適用于血液包括細(xì)菌、病菌等傳染的分子檢測(cè)。植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn):操作安全可靠,無需酚抽提。徐州正規(guī)RNA提取試劑供應(yīng)商
RNA提取試劑注意事項(xiàng):必須戴一次性手套操作。廈門RNA提取試劑哪家好
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對(duì)血清、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的,利用吸附柱法從血清、血漿樣品中簡(jiǎn)單快捷提取高純度高質(zhì)量的miRNA。該試劑盒中的裂解液miRBP1及柱結(jié)合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料,對(duì)RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有結(jié)合能力,與常用的抗凝劑(包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉、草酸鈉)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern雜交等后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作。普通植物總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱,可以從普通植物的根、莖、葉中快速提取總RNA,30~40分鐘內(nèi)即可完成提取過程,提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白質(zhì)的污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實(shí)驗(yàn)??俁NA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物組織中的色素、酚類等雜質(zhì),提取RNA的純度高,產(chǎn)量大。廈門RNA提取試劑哪家好