昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,室溫放置1~2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用~細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA。蕪湖RNA提取試劑服務(wù)電話
經(jīng)典Trizol法并不能獲得總RNA:這個(gè)事實(shí)可能會(huì)刷不少新手甚至老手的三觀,但確有實(shí)驗(yàn)支持:經(jīng)典Trizol法會(huì)選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點(diǎn),源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國(guó)鼎鼎大名的美女科學(xué)家,專(zhuān)做RNA相關(guān)的研究,包括miRNA。幾年前她們組發(fā)現(xiàn)一個(gè)奇怪的“現(xiàn)象”,即貼壁細(xì)胞在消化之后,會(huì)有一些miRNA的豐度突然降低,看起來(lái)好像是被快速“降解”掉了,并據(jù)此寫(xiě)了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現(xiàn),這個(gè)“現(xiàn)象”難以重復(fù):如果用Trizol做實(shí)驗(yàn),就一定是陽(yáng)性結(jié)果,而用試劑盒提RNA,就重復(fù)不出來(lái)。難道是號(hào)稱(chēng)能提總RNA的Trizol方案出了問(wèn)題?確實(shí)如此。經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),經(jīng)典的Trizol方案會(huì)使得低GC比的miRNA丟失。南昌RNA提取試劑直銷(xiāo)廠家為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配。
RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次。實(shí)際上,任何提取實(shí)驗(yàn),都會(huì)在純度和得率這一對(duì)矛盾中取舍。醇沉淀會(huì)將脂溶性雜質(zhì)去掉,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會(huì)連同RNA一起被沉淀下來(lái)。因此,多整幾次,并不會(huì)讓RNA的純度翻倍,反而還會(huì)有降低得率的風(fēng)險(xiǎn)。一般情況下,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低,那就只能放棄純度,在低溫沉淀數(shù)小時(shí),以換來(lái)較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水,以滅活RNase。這一點(diǎn)是要肯定的。不過(guò),在使用DEPC的過(guò)程中,又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水,會(huì)有一股“香甜”的味道。許多人會(huì)以為那是殘留的DEPC而不敢用。實(shí)際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類(lèi)副產(chǎn)物。
核糖核酸RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息傳遞過(guò)程中的橋梁。tRNA的功能是攜帶符合要求的氨基酸,以mRNA為模板,合成蛋白質(zhì)。核糖核酸由至少幾十個(gè)核糖核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵連接而成的一類(lèi)核酸,因含核糖而得名,簡(jiǎn)稱(chēng)RNA。RNA普遍存在于動(dòng)物、植物、微生物及某些病菌和噬菌體內(nèi)。RNA和蛋白質(zhì)生物合成有密切的關(guān)系。RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過(guò)程中的橋梁。在此過(guò)程中,轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(TransferRNA,tRNA)是攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合,而后核糖體RNA(RibosomalRNA,rRNA)將各個(gè)氨基酸殘基通過(guò)肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。提取的RNA樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶存在壓制作用的有機(jī)溶劑及過(guò)高濃度的金屬離子。
RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。無(wú)論是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織,該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。TRIpure試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)樣品,所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染,故而能夠作RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆等。和進(jìn)口品牌實(shí)驗(yàn)對(duì)照顯示,公司的產(chǎn)品質(zhì)量已經(jīng)達(dá)到甚至超過(guò)了進(jìn)口產(chǎn)品的質(zhì)量專(zhuān)門(mén)的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團(tuán)結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,同時(shí)使污染物通過(guò)柱被有效地洗去。溫州貴陽(yáng)RNA提取試劑
細(xì)菌總RNA提取試劑盒:提取的總RNA純度高,沒(méi)有DNA和蛋白質(zhì)污染,適用于RT-PCR。蕪湖RNA提取試劑服務(wù)電話
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過(guò)程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開(kāi)發(fā)了糖類(lèi)清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級(jí)代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒特點(diǎn):操作簡(jiǎn)單快速,處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲(chóng)中的多糖污染。適用于各種昆蟲(chóng)組織,每100mg組織能提取到20~30μg總RNA。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。一站式,提供RNase-free的樣品收集管·蕪湖RNA提取試劑服務(wù)電話