糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蠟切片脫蠟至水。(2)0.5%過碘酸水溶液5分鐘?;?%過碘酸95%酒精溶液(過碘酸再結(jié)晶應(yīng)重新配制使用)。(3)蒸餾水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分鐘。(Schiff氏液從冰箱取出升至室溫使用)(5)流水沖洗10分鐘。(6)蘇木素浸染細(xì)胞核2-3分鐘。(7)脫水、透明、封蓋。結(jié)果:糖原呈紅色,細(xì)胞核呈藍(lán)色。試劑配制:(1)0.5%過碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏試劑。堿性品紅1g蒸餾水200ml1N鹽酸(98.3ml比重1.16鹽酸,加入蒸餾水成1000ml)20ml偏重亞硫酸鈉或鉀1g堿性品紅1g加入200ml蒸餾水,攪拌加熱沸騰,待冷卻至50℃過濾,加入當(dāng)量鹽酸至25℃時(shí)加入偏重亞硫酸鈉。置于暗處,兩天后溶液變桔黃色或草黃色,然后加入少量活性碳并震蕩、過濾,此時(shí)溶液應(yīng)為無色。保存冰箱備用。溶液如顯淺紅色或草黃色,染色效果較差。加入少量活性碳并震蕩、過濾,此時(shí)溶液應(yīng)為無色。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒量大從優(yōu)
糖原染色臨床意義:1、急性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴組織惡性增生性疾病、紅白血病、戈謝病的原始細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)或陽性反應(yīng);缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙、骨髓增生異常綜合征亦可呈陽性反應(yīng);急性粒細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、良性淋巴細(xì)胞增多癥、尼曼-皮克細(xì)胞呈陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)。巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血等,幼紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)。偶有個(gè)別幼紅細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。2、幫助鑒別不典型巨核細(xì)胞和霍奇金細(xì)胞,巨核細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng);霍奇金細(xì)胞呈弱陽性或陰性反應(yīng)。3、幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺骨髓轉(zhuǎn)移的腺細(xì)胞,腺細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。天津糖原染色試劑盒推薦廠家切取的材料應(yīng)小而薄,便于固定液迅速滲入內(nèi)部。
特殊染色化學(xué)試劑的選擇:化學(xué)試劑的選擇主要針對(duì)自配試劑而言,對(duì)于商品化試劑盒則在于染液質(zhì)量。1、一般要求選用很好品牌的化學(xué)試劑,特別是一些染色中關(guān)鍵的試劑。很好的化學(xué)試劑(如Sigma、國(guó)藥、阿拉丁、西隴等)是保證高質(zhì)量染液的前提和關(guān)鍵,特別對(duì)于染液中的關(guān)鍵試劑尤為重要。如堿性品紅在一些染色液(抗酸、無色品紅、醛品紅等)中均為主要試劑,其質(zhì)量決定了較終的染色效果。如配制無色品紅染液時(shí),所使用的偏重亞硫酸鈉試劑質(zhì)量不合格,則會(huì)導(dǎo)致染液配制失敗,無法染出合格的切片。2、純度一般以分析純?yōu)橹鳌?/p>
糖原染色生物技術(shù)優(yōu)勢(shì):(1)擁有針對(duì)不同組織的特殊固定液;(2)擁有日本進(jìn)口的各種染料,保證切片染色效果;(3)擁有千錘百煉的專業(yè)人才隊(duì)伍,保證實(shí)驗(yàn)快速、有效的完成。實(shí)驗(yàn)樣本要求:(1)植物材料在選擇時(shí)須盡可能不損傷植物體或所需要的部分;(2)動(dòng)物材料取用時(shí)需對(duì)動(dòng)物施以麻醉,常用的麻醉劑有氯仿和,或?qū)?dòng)物殺死后迅速取出所需要的組織;(3)取材必須新鮮,這一點(diǎn)對(duì)于從事細(xì)胞生物學(xué)研究尤為重要,應(yīng)該盡可能割取生活著的組織塊,并隨即投入固定液,固定液與組織塊的體積比應(yīng)在10:1;(4)切取材料時(shí)刀要銳利,避免因擠壓細(xì)胞使其受到損傷;(5)切取的材料應(yīng)小而薄,便于固定液迅速滲入內(nèi)部。一般厚度不超過3mm,大小不超過5×5m㎡。糖類從組織化學(xué)技術(shù)角度來分,可分為多糖、中性粘液物質(zhì)。
染色試劑盒:GUS基因就是β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuronidase),是從大腸桿菌K-12菌株分離出的一種酸性水解酶。該基因產(chǎn)物為β-葡萄糖苷酸酶,屬水解酶類,相當(dāng)穩(wěn)定而不易降解,以β-葡萄糖苷酸酯類物質(zhì)為底物,其反應(yīng)產(chǎn)物可用多種方法檢測(cè)出來。由于絕大多數(shù)植物沒有檢測(cè)到葡萄糖苷酸酶的背景活性,因此這個(gè)基因被普遍應(yīng)用于基因調(diào)控的研究中。根據(jù)GUS基因檢測(cè)所用的底物不同,可以選擇三種檢測(cè)方法:組織化學(xué)法、分光光度法和熒光法(靈感度為分光光度檢測(cè)法較高)。其中較為常用的是組織化學(xué)法。對(duì)某種鹽基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺藍(lán)有異染性。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒量大從優(yōu)
主要用來顯示糖原和其他多糖物質(zhì),因此也稱作糖原染色。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒量大從優(yōu)
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強(qiáng)氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎┎籗chiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時(shí)應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時(shí)間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。PAS技術(shù)是很少可檢測(cè)不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒量大從優(yōu)