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可以。為了能夠高效提取細(xì)胞培養(yǎng)上清中的外泌體,磁珠可重復(fù)使用5次(同一樣品)。試劑盒里的緩沖液含5次提取需要的量。1mL體積以上細(xì)胞上清樣本建議進(jìn)行濃縮后再回收,提取時(shí)可進(jìn)行反復(fù)抽提,提高提取效率。用血液樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),需要根據(jù)磁珠狀況來判斷是否能重復(fù)利用;若磁珠發(fā)生聚集,利用渦旋儀也無法使磁珠分散,不建議繼續(xù)使用。詳情參考操作說明書。太好了,這樣實(shí)驗(yàn)成本瞬間就降下來了,那樣品純化所需的比較低量是?老師:使用旋轉(zhuǎn)器的需要500μL以上,使用離心管混合器的需要100μL。樣品量更少的情況下加TBS到所需比較低量后再使用ExosomeCapture固定化磁珠。同學(xué):電鏡分析需要外泌體的量是多少?用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):抽血時(shí)間。深圳外泌體提取試劑哪里買
由于這些核酸被囊膜包裹而被保護(hù),穩(wěn)定性高,不易降解,是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測的非常理想的新型生物標(biāo)記物一些疾病的早期診斷、用藥監(jiān)控、預(yù)后判斷。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認(rèn)識加深,外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷、治病和監(jiān)測;如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和細(xì)胞液中快速提取的,其是活細(xì)胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA),在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用。金華外泌體提取試劑單價(jià)在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用。
研究探討了外泌體是否可以作為RNAi的有效載體的可能性。與脂質(zhì)體和其他合成藥物納米顆粒載體不同,外泌體含有可能增強(qiáng)內(nèi)吞作用的跨膜和膜錨定蛋白,從而促進(jìn)其內(nèi)容物的遞送。CD47是外泌體蛋白質(zhì)之一,是一個(gè)普遍表達(dá)的整合素相關(guān)跨膜蛋白,其部分功能可以保護(hù)細(xì)胞免受吞噬作用。CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα,也稱為CD172a)的配體,CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號,從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖,增強(qiáng)胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細(xì)胞有一定毒性作用,但使用外泌體能夠較小化對細(xì)胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn),CD47和病基因KRAS驅(qū)動(dòng)的胞飲作用都會(huì)壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,并增強(qiáng)胰腺病細(xì)胞對外泌體的特異性。所以,外泌體的這種特性增強(qiáng)了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實(shí)驗(yàn)PDAC小鼠模型的總生存期。
用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng):1、抽血技巧。操作要輕柔迅速。試管可翻轉(zhuǎn)8-10次使樣本與抗凝劑混勻,避免劇烈搖晃?;靹蚝螅瑢⒃嚬芄潭ù怪狈胖糜陔x心分離器,在頂部記錄抽血的準(zhǔn)確時(shí)間,因?yàn)槌檠c離心之間的時(shí)間間隔可能是一個(gè)影響因素。外泌體在抽血后30分鐘內(nèi)是比較穩(wěn)定的,若時(shí)間過長將導(dǎo)致外泌體數(shù)量增加。血小板極易因抽血時(shí)的物理因素而并釋放出外泌體,其中包括接觸、壓力、切力。2、抽血時(shí)間。除了血液黏度,體內(nèi)血液的各項(xiàng)指標(biāo)在1天中變化很大。生理節(jié)律會(huì)對血小板的產(chǎn)生很大的影響。白細(xì)胞的募集和循環(huán)系統(tǒng)中促炎細(xì)胞和細(xì)胞會(huì)隨時(shí)間變化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會(huì)隨時(shí)間變化。目前尚無設(shè)計(jì)較好的實(shí)驗(yàn)對證實(shí)不同時(shí)間血液中外泌體的變化,故應(yīng)在相同的時(shí)間采集樣本。目前飲食是否會(huì)對EV產(chǎn)生影響尚未可知,但是由于脂蛋白可運(yùn)載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類型、數(shù)量和作用,故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時(shí)間進(jìn)行??蓪⑼饷隗w吸附并分離出來。
外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。金華外泌體提取試劑單價(jià)
外泌體提取:基于聚合物的沉淀技術(shù)。深圳外泌體提取試劑哪里買
外泌體與肺病預(yù)后:在當(dāng)代精細(xì)醫(yī)療的大趨勢下,外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和治病提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)一些病癥來源的外泌體在肺病的發(fā)生的發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究,臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定較合適的治病方案,以達(dá)到改善肺病患者生存率,延長肺病患者生存時(shí)間的目的。但是,針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,如:外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機(jī)制及信號通路等??偠灾?,外泌體的研究有著廣闊的前景,基于外泌體與肺病的研究,有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和治病的有效措施,造福更多的患者。深圳外泌體提取試劑哪里買