細(xì)胞RNA提取的方法:實(shí)驗(yàn)提取步驟:標(biāo)準(zhǔn)Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進(jìn)口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機(jī)溶劑,有效的使有機(jī)相和無(wú)機(jī)相迅速分離。有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進(jìn)入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機(jī)輕輕拿出EP管,以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導(dǎo)致下層沉淀激起。吸取上清的時(shí)候一定要?jiǎng)幼鬏p柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,然后12000rpm離心10min。血漿/血清RNA提取試劑盒:30~40分鐘內(nèi)即可完成提取過(guò)程,提取的總RNA純度高。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑供應(yīng)商
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法,異硫氰酸胍法操作簡(jiǎn)單快捷,適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織;Trizol法裂解能力較強(qiáng),尤其適合小樣本及特別難提取的組織,如兔子皮膚,動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提取;另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑,還可以用于植物組織、細(xì)菌、菌類等組織的提取。對(duì)于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問(wèn)題是:(1)RNA產(chǎn)量較低;(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染;(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染;(4)樣品降解等問(wèn)題。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑供應(yīng)商在實(shí)際RNA提取中,有幾個(gè)提取原則:保證RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性。
安德魯·法爾稱:“克雷格和我的工作是研究為什么一些基因會(huì)停止運(yùn)行,我們?cè)噲D去控制它們,我們發(fā)現(xiàn)了一些東西可以有效地中止它們。這些基因并不能告訴你它們能做什么,所以如果你能中止它們,你就可以開(kāi)始了解它們能做什么。不過(guò),較初發(fā)現(xiàn)RNA現(xiàn)象的是一位華人學(xué)者,非常可惜,他沒(méi)有進(jìn)一步弄清這是為什么?!倍税l(fā)現(xiàn)的是一個(gè)有關(guān)控制基因信息流程的關(guān)鍵機(jī)制。人們的基因組通過(guò)從細(xì)胞核里的DNA向蛋白質(zhì)的合成機(jī)制發(fā)出生產(chǎn)蛋白質(zhì)的指令,這些指令通過(guò)mRNA傳送。他們發(fā)現(xiàn)一種可以用特定基因降解mRNA的方式,在這種RNA干擾現(xiàn)象中,雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。這項(xiàng)技術(shù)被用于全球的實(shí)驗(yàn)室來(lái)確定在各種病癥中哪種基因起到了重要作用。
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡(jiǎn)介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過(guò)度干燥不易溶解問(wèn)題。3、獨(dú)有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過(guò)程,提取RNA純度更高。5、有效的去除了無(wú)用的5S在總RNA中含量,提高了純度~總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡(jiǎn)介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過(guò)度干燥不易溶解問(wèn)題。3、獨(dú)有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。RNA提取:無(wú)論是從細(xì)胞、血液、還是組織等高難度樣本提取RNA。蘇州RNA提取試劑
馬鈴薯塊莖,蘋(píng)果,西瓜果肉,獼猴桃,梨,月季等,中快速提取總RNA,同時(shí)可以處理大量不同樣品。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑供應(yīng)商
植物花總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱,配合特殊的提取緩沖液,可以從多糖多酚植物的根、莖、葉以及花組織中快速提取總RNA,40~60分鐘內(nèi)即可完成提取過(guò)程,提取的總RNA純度高,沒(méi)有DNA和蛋白質(zhì)污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實(shí)驗(yàn)。特殊的提取緩沖液保證特殊植物材料中的總RNA充分溶解??俁NA提取速度快,提取效率高。有效去除植物花組織中的多糖、多酚類等雜質(zhì),提取純度高。細(xì)菌總RNA提取試劑盒:本試劑盒可以快速?gòu)募?xì)菌體內(nèi)提取總RNA,提取的總RNA純度高,沒(méi)有DNA和蛋白質(zhì)污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實(shí)驗(yàn)。吸附柱特異吸附總RNA,提取速度快。提取效率高。有效去除蛋白質(zhì)、鹽類、脂類等雜質(zhì),提取純度高。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑供應(yīng)商