糖原染色用于鑒別淋巴系統(tǒng)細胞增生的性質(zhì)鑒別紅細胞系統(tǒng)增生的性質(zhì)[英文縮寫]PAS[參考值]正常人淋巴細胞PAS反應積分正常人幼紅細胞PAS反應積分[臨床意義]惡性淋巴瘤、急慢性淋巴細胞白血病時PAS積分升高巨幼細胞性貧血、溶血性貧血、再障貧血時幼紅細胞PAS反應多為陰性紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征時幼紅細胞PAS反應積分可40甚至高達100--200以上用于不典型巨核細胞與李-斯細胞的鑒別前者PAS反應為強陽性后者為陰性或弱陽性;用于高雪細胞和尼曼一匹克細胞的鑒別前者PAS反應為強陽性而后者反應為陰性或弱性。擁有日本進口的各種染料,保證切片染色效果。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒進貨價
PAS染色試劑配制及染色方法:1.材料與方1.1實驗材料新鮮小白鼠肝臟、腎臟標本各30例,均來自我室實驗材料。1.2主要試劑1.2.1AAF固定液又稱酒精醋酸福爾馬林混合固定液,其配方:無水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2Carnoy固定液氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3過碘酸溶液0.5g過碘酸(HIO)溶于100mL蒸餾水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:過碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸鈉0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4無色品紅液(Schiff氏液)在三角燒內(nèi)加入蒸餾水500mL,煮沸后,在保持微沸的情況下,加入堿性品紅2.5g,并不斷搖動約5min(勿使之沸騰),使堿性品紅徹底溶解(溶解液為深紅色)。冷卻到50℃時,過濾,加入1N鹽酸50mL,再待冷卻至25℃時加入偏重亞硫酸鈉2.5g,塞住瓶口,搖動容器以充分混合(此時顏色明顯變淡),然后避光放置或冰箱內(nèi)24h。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒服務電話冷凍切片染色時間盡量要短。
PAS染色的臨床意義:1.紅細胞系統(tǒng):①紅血病或紅白血病時幼紅細胞可呈陽性反應,有時陽性反應幼紅細胞的百分比增高,陽性反應的程度也很強。有時紅細胞也呈陽性反應。②缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血(又稱地中海貧血)以及骨髓增生異常綜合征時幼紅細胞可呈陽性反應,有時陽性反應幼紅細胞的百分比也較高。有時紅細胞也可呈陽性反應。③巨幼細胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和白血病等疾病時,幼紅細胞為陰性反應,有時*個別幼紅細胞呈陽性反應
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:Schiff氏染液的配制是關鍵,尤其是偏重亞硫酸鈉的質(zhì)量,打開應是粉劑,且?guī)в辛虻臍馕叮舫蓤F或沒有氣味,則不能用,配制時使用的容器、藥勺、稱藥天平與稱藥紙等必須潔凈、無污染。新配制好的Schiff劑為無色透明液體[1],配好后可分成小份置于-20℃保存,用時取一份恢復到室溫即可。沈洪武等通過對比染色發(fā)現(xiàn),冷凍保存1年的Schiff液的染色結(jié)果與新鮮配制的染色結(jié)果一致[5]。0.5%~1%高碘酸(pH值在3.0~5.0之間),環(huán)境溫度以不高于20℃為宜,室溫高時氧化時間適當縮短;如果染色時環(huán)境溫度較高且高碘酸作用時間長,可使某些物質(zhì)成分發(fā)生非特異反應,使染色結(jié)果出現(xiàn)假陽性。因此,室溫較高時可適當縮短反應時間。擁有千錘百煉的專業(yè)人才隊伍,保證實驗快速、有效的完成。
糖原染色是病理學中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術顯示黏蛋白,該法常用來顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強氧化劑,它能氧化糖類及有關物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎?,醛不Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時應注意選擇好高碘酸濃度和氧化時間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化,這是很關鍵的步驟。PAS技術是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應用PAS技術之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標冸唾液的考慮,不主張應用唾液。急性單核細胞白血病原、幼單核細胞POX染色多呈細小顆粒弱陽性反應。湖南正規(guī)糖原染色試劑盒哪里買
可將胰酶消化后細胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止進一步的損傷。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒進貨價
GUS染色步驟:1.將準備好的材料浸泡在GUS染色液中,于25-37℃保溫1小時至過夜。2.葉片等綠色材料轉(zhuǎn)入70%乙醇中脫色2-3次,至陰性對照材料呈白色。3.肉眼或顯微鏡下觀察,白色背景上的藍色小點即為GUS表達位點。注:用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和部位的不同而異。例如,擬南芥的根、花和葉片以及幼苗的根就可以不作任何預處理而直接染色。但是像和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片(1-3mm)。當操作大的組織和樣品時,可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細胞。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒進貨價
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