濟南無血清細胞凍存液廠家

無血清快速細胞凍存液保存條件：儲存于4℃以下。質量保障期從產品的生產日期起，為期2年。3個月以上沒有使用凍存液計劃時，盡可能-20℃冷凍保存。為避免重復凍融過程可能導致的凍存液品質下降和性能降低，推薦將產品分裝成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。無血清快速細胞凍存液細胞冷凍保存方法：選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1、按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2、按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。3、取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4、加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。5、將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6、直接將含細胞混合液的凍存管放入-70℃以下冰箱，長期冷凍保存。7、若研究者需要液氮保存時，可將完全凍結的凍存管（放入-70℃以下冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。無血清細胞凍存液產品特色：即用型，無需現配，即開即用。濟南無血清細胞凍存液廠家

產品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱，無需降溫，節(jié)省時間和精力；b.即用型，無需現配，操作方便，可減少實驗中因操作引起的污染；c.在多種哺乳細胞系中經過性能驗證，其復蘇率和活率達90%以上；d.可長期存儲于-80℃冰箱(5年以上)，取用方便；e.采用成分明確的無血清配方，價格比常規(guī)自配細胞凍存液更為低廉；保存溫度：2~8℃具體操作步驟：1、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中細胞按常規(guī)方法消化，或分離獲得原代細胞后，收集于離心管中。2、使用離心機離心，去除上清，收集細胞沉淀。3、根據細胞生長密度加入適量的細胞凍存液進行重懸，充分混勻(推薦凍存密度為1-2×106/ml)。4、將細胞懸液分裝至凍存管中，直接放置于-80℃冰箱保存。24小時后可移入液氮長期保存(可選)。溫州昆明無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液：一些保護劑不能穿透細胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結合細胞外的水分子。

細胞凍存注意事項：1、從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但為對數生長期細胞。在凍存前一日換一次培養(yǎng)液;2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍壞;3、凍存和復蘇用新配制的培養(yǎng)液。4、取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項特別重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致炸列。凍存液產品針對細胞凍存的特殊配方，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇率和活力。

細胞凍存步驟說明：配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;取對數生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細胞消化下來;離心1000rpm，5min;去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節(jié)存液中細胞的較終密度為5×106/ml~1×107/ml;將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml;在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。降低細胞外溶液的電解質濃度，減少陽離子進入細胞的數量。

細胞凍存的基本原理：細胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時會集體不工作，低溫貯藏的目的是通過較低溫使細胞代謝活動近乎停止。細胞因此進入休眠狀態(tài)，使細胞“不會老”，所以可以長期保存。因為凍融過程對所有細胞和組織都是有一定傷害的，因此，需要開發(fā)出有效的技術來防止細胞死亡和損傷。低溫保護劑可保護細胞不受細胞內冰凍影響，目前多采用DMSO，甘油，乙二醇和丙二醇等滲透型低溫保護劑。它們的作用機制包括：自由進入細胞，取代水，使冰點下降，充當鹽的二次溶劑，提高細胞膜對水的通透性。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：含DMSO、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細胞凍存液。珠海正規(guī)無血清細胞凍存液廠家直銷

無血清細胞凍存液用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。濟南無血清細胞凍存液廠家

細胞凍存：取出凍存管，注明細胞名稱，代數，日期。離心后，以無菌吸管吸棄上清，不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻，根據計數結果，將細胞總數調節(jié)成細胞數量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴密封口后，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1℃?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中，然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置，可以先將凍存管置于4℃30min，再-20℃凍存1h直至完全冷凍，再轉移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經冷凍的細胞轉移到液氮容器中，置于液氮上方的氣相空間中儲存。濟南無血清細胞凍存液廠家

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