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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-10-19

原代細(xì)胞培養(yǎng)問題:1、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,多久更換一次培養(yǎng)基這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基,許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。注意:凍存細(xì)胞復(fù)蘇后,在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。2、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎?這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞,不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等,可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。然而,需要注意的是再次凍存的過(guò)程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)性能的改變。3、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基?我們推薦的用量為:T-25培養(yǎng)瓶5ml,T-75培養(yǎng)瓶15ml,T-150培養(yǎng)瓶30ml。在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長(zhǎng)的活性物質(zhì),使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(zhǎng)。長(zhǎng)沙原代細(xì)胞分離試劑盒哪家好

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分散細(xì)胞培養(yǎng)大致步驟為:將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出離散成單個(gè)細(xì)胞(常用胰蛋白酶),置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖(注意整個(gè)過(guò)程無(wú)菌)。原代培養(yǎng):當(dāng)采用外科操作的方法將細(xì)胞從有機(jī)體中分離下來(lái),然后置于合適的培養(yǎng)環(huán)境中,它們會(huì)附著、分裂和生長(zhǎng)。這稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)有兩種基本的方法。靠前種,使用外植塊,將小片的組織粘附到玻璃或經(jīng)處理的塑料培養(yǎng)瓶中,并浸于培養(yǎng)液中。幾天之后,單個(gè)細(xì)胞將從組織外植塊中移動(dòng)到培養(yǎng)瓶的表面或基質(zhì)中開始分裂生長(zhǎng)。第二種方法,也是使用更普遍的方法,通過(guò)在組織碎片中加入消化(蛋白水解)酶,如胰酶或膠原酶,消化成團(tuán)聚集的細(xì)胞從而加快這一步驟。得到單細(xì)胞的懸液,然后將其置于含有培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),讓其繼續(xù)生長(zhǎng)分裂。這種方法成為酶解。蘇州原代細(xì)胞分離試劑盒生產(chǎn)廠家將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,注意保護(hù)手和眼睛。

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細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)及常見問題解答:1、培養(yǎng)基的選擇依細(xì)胞種類而定。如果是從別的實(shí)驗(yàn)室借來(lái)的細(xì)胞,較初階段一定要保持細(xì)胞原有的培養(yǎng)條件;特殊種類的細(xì)胞,比如內(nèi)皮細(xì)胞,可以借鑒網(wǎng)上培養(yǎng)成功的條件,添加一些特定成分。2、液體培養(yǎng)基的保存條件應(yīng)是冰箱4度冷藏。小六兒見過(guò)有的大實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞量多,一次性購(gòu)買的培養(yǎng)基瓶數(shù)也多,有些人可能覺得-20冰箱保存時(shí)間會(huì)更久一些。但是經(jīng)過(guò)冷凍后的培養(yǎng)基再溶化時(shí),你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的顏色發(fā)生變化,顏色變深,這就是培養(yǎng)基的PH值升高了。3、培養(yǎng)基中都含有大量的谷氨酰胺,用來(lái)合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的核酸和蛋白質(zhì)。但是谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定,保存4周后的培養(yǎng)基需要重新加入谷氨酰胺。所以盡量不要大批量購(gòu)買培養(yǎng),也不要一次配太多的培養(yǎng)基

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作步驟(以24孔培養(yǎng)板為例):A.細(xì)胞接種:轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在接種細(xì)胞,每孔500μl培養(yǎng)基(不可加物品),使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)密度在30-50%。B.siRNA-RFectPM混合物準(zhǔn)備:1.6pmolsiRNA用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋。2.2μlRFectPM用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻,室溫孵育5min。注意:確保在25min內(nèi)執(zhí)行第三步操作,不要過(guò)于延遲。3.孵育5min后,將siRNA稀釋液與RFectPM稀釋液混合(總體積100μl)。輕輕混勻,室溫孵育20min。C.將混合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)(完全培養(yǎng)基培養(yǎng)):1.將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi),培養(yǎng)孔內(nèi)含有0.5ml培養(yǎng)的細(xì)胞。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板,混勻。2.37°C培養(yǎng)18-72h,檢測(cè)基因克制效果。如果需要,細(xì)胞培養(yǎng)4-6h時(shí)可以更換培養(yǎng)基,但不是必須。孵育時(shí)間的長(zhǎng)短,取決于細(xì)胞類型、所干擾基因本身及分析方法??稍O(shè)置不同的孵育時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定較佳孵育時(shí)間。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)優(yōu)化:為了提高轉(zhuǎn)染效率,較好對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化,特別是開始使用。加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。

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原代細(xì)胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用,市場(chǎng)前景廣闊。原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和部位后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此,較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上,通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞如何傳代接種:原代細(xì)胞(primaryculturecell)是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅普遍應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等,還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、藥物的研究等。會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。無(wú)錫原代細(xì)胞分離試劑盒平均價(jià)格

培養(yǎng)時(shí)間無(wú)論是酶消化法還是組織塊法。長(zhǎng)沙原代細(xì)胞分離試劑盒哪家好

關(guān)于細(xì)胞株和細(xì)胞系以及原代細(xì)胞的區(qū)別:1、獲取方法不同,原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞;細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物;細(xì)胞系是原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)開始傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。2、原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細(xì)胞的生長(zhǎng)就會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40--50代,這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株;細(xì)胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”,不能再傳下去。但是有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變,并且?guī)в凶兊奶攸c(diǎn),有可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制地傳代下去,這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。長(zhǎng)沙原代細(xì)胞分離試劑盒哪家好