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鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明：含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。合肥正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：膠原蛋白具有抗氧化作用，但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建，對(duì)于其抗氧化作用目前尚無(wú)相關(guān)研究。目的：探討鼠尾膠原對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實(shí)驗(yàn)組）和普通培養(yǎng)皿（對(duì)照組）中，并且均用0，10，100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài)，應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率，TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài)，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率，黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平，Western-Blot檢測(cè)凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)。成都鼠尾膠原哪家便宜鼠尾膠原醋酸溶解：在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理，收集上清液；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時(shí)，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH=6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時(shí)，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀。

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑，可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。制備鼠尾膠原方法：1、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘；2、手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱；3、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡；4、重復(fù)步驟2、3，直至尾腱量夠用；5、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）；6、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中；7、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液；8、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期；9、離心，4000轉(zhuǎn)/分，10-15分鐘；10、吸取上清，分裝成小瓶，4℃保存。取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘。

鼠尾膠原使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例，用無(wú)菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開(kāi)蓋在超凈臺(tái)上過(guò)夜晾干，也可以在室溫放置1小時(shí)后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。三維膠原凝膠的制備：A、無(wú)細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。太原正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家

鼠尾膠原，是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用。合肥正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家

膠原蛋白的功效與作用：1、可以作為一種補(bǔ)鈣食品。膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運(yùn)輸鈣到骨細(xì)胞的運(yùn)載工具，骨細(xì)胞中的骨膠原是羥基磷灰石的黏合劑，它與羥摹磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。因此，只要攝入足夠的膠原蛋白，就能保證正常機(jī)體鈣質(zhì)的攝入量，膠原蛋白可成制成補(bǔ)鈣的保健食品。2、可以為特殊人群使用。婦科疾病的根源來(lái)自于內(nèi)分泌失調(diào)，膠原蛋白能夠改善婦科疾病的困擾，而更年期的婦女更需要膠原蛋白供給身體所需，使得更年期婦女能夠更輕松面對(duì)各種不適。合肥正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家