細(xì)胞被支原體污染后可能會(huì)出現(xiàn)以下幾種情況:
1. 生長速度變慢:支原體污染的細(xì)胞生長速度可能會(huì)減慢,甚至停止生長。
2. 形態(tài)改變:部分細(xì)胞可能會(huì)變圓,從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細(xì)胞在支原體污染后,形態(tài)變化可能不明顯,但有些細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)體積增大、細(xì)胞碎片增多等現(xiàn)象。
3. 培養(yǎng)液pH變化:支原體污染的細(xì)胞可能導(dǎo)致培養(yǎng)液pH值變化明顯,更換培養(yǎng)液后幾小時(shí)內(nèi)變酸(顏色變黃)。
4. 細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積:在某些情況下,細(xì)胞與細(xì)胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積,影響細(xì)胞的正常生長和傳代。
5. 細(xì)胞功能受損:支原體污染可能會(huì)影響細(xì)胞的代謝和功能,如影響細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA、RNA的合成。
6. 染色體畸變:支原體污染可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細(xì)胞產(chǎn)量受影響:對(duì)于巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的培養(yǎng),支原體污染可能會(huì)抑制干擾素的合成和降低其活性。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染:污染的細(xì)胞可能成為實(shí)驗(yàn)室的污染源,影響工作區(qū)域、培養(yǎng)箱和液氮罐等。
9. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不確定性:使用被支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)可能會(huì)得到不準(zhǔn)確的結(jié)果,影響科研的可靠性。
支原體檢測(cè)PCR法和LAMP方法的優(yōu)劣勢(shì)比較。蘇州細(xì)胞支原體檢測(cè)試劑廠家
支原體預(yù)防的實(shí)驗(yàn)步驟主要包括以下幾個(gè)方面:
1. 無菌操作技術(shù):在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,包括穿戴適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)服、手套,使用無菌工具和耗材。
2. 環(huán)境控制:保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔,定期消毒工作臺(tái)和實(shí)驗(yàn)室表面,使用層流罩或生物安全柜進(jìn)行細(xì)胞操作。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑的無菌過濾:所有加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中的試劑和補(bǔ)充物,如血清、抗*素等,都應(yīng)通過無菌過濾以去除支原體。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑的檢測(cè):在添加到細(xì)胞培養(yǎng)物之前,對(duì)新的細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑進(jìn)行支原體檢測(cè),以確保它們沒有被污染。
5. 定期檢測(cè):即使采取了預(yù)防措施,也應(yīng)定期對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行支原體檢測(cè),以確保及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理潛在的污染。
6. 避免交叉污染:避免從一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)物到另一個(gè)的交叉污染,使用的移液器和工具,避免在不同細(xì)胞培養(yǎng)物之間重復(fù)使用。
7. 細(xì)胞培養(yǎng)物的篩選:使用已知無支原體污染的細(xì)胞株進(jìn)行實(shí)驗(yàn),或者在開始實(shí)驗(yàn)前對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行篩選。
8. 使用預(yù)防性試劑:在某些情況下,可以在細(xì)胞培養(yǎng)過程中添加特定的預(yù)防性試劑,如支原體預(yù)防劑,以降低污染風(fēng)險(xiǎn)。
深圳支原體預(yù)防試劑貨期支原體檢測(cè)方法qPCR法?
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一種高度靈敏和特異的分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測(cè)和定量DNA序列。在支原體檢測(cè)中,qPCR法的原理主要包括以下幾個(gè)步驟:
1. DNA提?。菏紫葟拇郎y(cè)樣本中提取DNA,這可能包括細(xì)胞培養(yǎng)上清液或組織樣本中的支原體DNA。
2. 設(shè)計(jì)特異性引物:針對(duì)支原體的保守DNA序列,如16S rRNA基因,設(shè)計(jì)特異性的DNA引物。
3. 熒光標(biāo)記探針:使用熒光標(biāo)記的探針,該探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ),能夠在PCR擴(kuò)增過程中與擴(kuò)增的DNA結(jié)合。
4. Ct值確定:Ct值(閾值循環(huán)數(shù))是指在PCR反應(yīng)中,熒光信號(hào)強(qiáng)度超過預(yù)定閾值的循環(huán)次數(shù)。Ct值越低,表示樣本中支原體DNA的量越多。
5. 定量分析:通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或相對(duì)定量法,將Ct值轉(zhuǎn)換為支原體DNA的定量結(jié)果。
qPCR法的優(yōu)勢(shì)在于其高靈敏度和特異性,能夠檢測(cè)到非常低水平的支原體污染,并且可以在短時(shí)間內(nèi)提供結(jié)果,這對(duì)于需要快速檢測(cè)的生物制品生產(chǎn)和細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量控制非常重要
檢測(cè)新鮮培養(yǎng)基是否有支原體污染,可以采用以下五種方案:
1. 培養(yǎng)法:這是一種傳統(tǒng)且可靠的方法,通過將培養(yǎng)基接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上,觀察是否有支原體生長。這種方法較為耗時(shí),但成本較低。
2. 熒光染色法:使用特定的熒光染料(如Hoechst 33258)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,然后在熒光顯微鏡下觀察。如果存在支原體污染,可以看到細(xì)胞表面或細(xì)胞間隙中支原體DNA的熒光染色。
3. PCR法:通過設(shè)計(jì)針對(duì)支原體特定序列的引物,利用PCR技術(shù)特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA。PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),如果出現(xiàn)條帶則表明存在支原體污染。
4. 電鏡觀察法:使用電子顯微鏡直接觀察培養(yǎng)細(xì)胞中的支原體污染情況。這種方法可以提供直觀的支原體形態(tài)信息,但設(shè)備要求較高。
5. 一步法恒溫支原體檢測(cè):使用特定的試劑盒,如Yeasen一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑,采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),通過顏色變化(由藍(lán)紫色變?yōu)樘焖{(lán)色)進(jìn)行快速檢測(cè)。
支原體檢測(cè)方法qPCR法的應(yīng)用。
目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動(dòng)物、昆蟲和植物中,其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實(shí)驗(yàn)室中的傳播來源多種多樣,主要來源包括實(shí)驗(yàn)室人員、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外,來自其他實(shí)驗(yàn)室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑;非無菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液;實(shí)驗(yàn)室人員;培養(yǎng)箱;液氮;空氣顆粒和氣溶膠;抗*素的過度使用;細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封;以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。
支原體檢測(cè)假陰性的原因?杭州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染怎么去除?蘇州細(xì)胞支原體檢測(cè)試劑廠家
支原體去除后對(duì)細(xì)胞檢測(cè)的影響主要取決于去除方法和去除后的處理。以下是一些可能的影響:
1. 去除方法的影響:不同的支原體去除方法可能對(duì)細(xì)胞檢測(cè)產(chǎn)生不同的影響。例如,一些去除方法可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的代謝和增殖產(chǎn)生暫時(shí)性的影響,這可能會(huì)影響某些類型的細(xì)胞檢測(cè)。
2. 去除后的處理:去除支原體后,細(xì)胞可能需要一段時(shí)間來恢復(fù)其正常的生理狀態(tài)。在這段時(shí)間內(nèi),細(xì)胞的某些特性可能與去除前不同,這可能會(huì)影響細(xì)胞檢測(cè)的結(jié)果。
3. 細(xì)胞恢復(fù)情況:如果細(xì)胞在去除支原體后能夠成功恢復(fù),那么它們?cè)跈z測(cè)中的表現(xiàn)可能會(huì)與未受污染的細(xì)胞相似。然而,如果細(xì)胞恢復(fù)不完全,可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 檢測(cè)類型的相關(guān)性:不同的細(xì)胞檢測(cè)方法對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的敏感性不同。一些檢測(cè)可能對(duì)細(xì)胞的微小變化非常敏感,而其他檢測(cè)則可能較為寬容。
蘇州細(xì)胞支原體檢測(cè)試劑廠家