LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification),是一種在恒定溫度下進(jìn)行的核酸擴(kuò)增方法。它由日本學(xué)者Notomi于2000年開發(fā)。LAMP法檢測有以下特性:
快速高效:LAMP技術(shù)可以在1小時(shí)內(nèi)把幾拷貝的目的序列迅速擴(kuò)增到10^9^~10^10^拷貝,擴(kuò)增效率高。
簡便性:LAMP技術(shù)不需要進(jìn)行模板的預(yù)變性,減少了PCR技術(shù)升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實(shí)驗(yàn)儀器的要求,同時(shí)擴(kuò)增效率高,可以在較短時(shí)間內(nèi)完成檢測。
LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)應(yīng)用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測等領(lǐng)域,并且還將廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測、食源安全等領(lǐng)域,具有更為廣闊的發(fā)展應(yīng)用前景。
細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體檢測的重要性?上海細(xì)胞支原體預(yù)防現(xiàn)貨
支原體預(yù)防的策略主要包括以下幾個方面:
1. 控制污染源:通過定期檢測和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在,從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2. 改善無菌操作技術(shù):通過提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識,避免在細(xì)胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。
3.使用無菌設(shè)備和耗材:使用無菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,如無菌培養(yǎng)基、血清等,減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
4. 定期消毒和清潔:對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔,包括工作臺、培養(yǎng)箱等,以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑:使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑,如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺噴霧、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等,以預(yù)防支原體污染。
杭州細(xì)胞支原體去除多少錢支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟?
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能由以下原因引起:
1. 擴(kuò)增產(chǎn)物污染:PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理,極微量的污染就可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
2. 引物設(shè)計(jì)不當(dāng):引物設(shè)計(jì)不夠特異性,可能會與非目標(biāo)序列發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
3. 試劑質(zhì)量問題:使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質(zhì)量不佳,可能引起非特異性擴(kuò)增或假陽性結(jié)果。
4. 操作技術(shù)問題:實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范,如混合樣本、標(biāo)簽錯誤或樣本標(biāo)識不清等,可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
5. PCR反應(yīng)條件設(shè)置不當(dāng):不恰當(dāng)?shù)腜CR反應(yīng)條件,如溫度和時(shí)間選擇不當(dāng),可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
6. DNA污染:PCR環(huán)境中的DNA污染會干擾結(jié)果,導(dǎo)致假陽性
支原體檢測實(shí)驗(yàn)方法需要考慮以下幾個關(guān)鍵點(diǎn):
1. 樣本的采集與處理:確保樣本的采集和處理過程符合無菌操作規(guī)范,避免交叉污染。
2. 實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化:制定詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作流程,包括樣本接種、培養(yǎng)條件、觀察時(shí)間點(diǎn)等,以保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
3. 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基:根據(jù)支原體的特性選擇合適的培養(yǎng)基,如支原體肉湯4. 培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,并確保培養(yǎng)基的靈敏度和特異性。
5. 設(shè)置對照組:實(shí)驗(yàn)中應(yīng)包括陽性對照和陰性對照,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的有效性和排除假陽性或假陰性結(jié)果。
支原體的檢測方法有哪些?
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點(diǎn):
1. 無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細(xì)胞壁的微生物,這使得許多作用于細(xì)胞壁的抗*素對支原體無效。
2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見,因此細(xì)胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 :支原體污染源包括細(xì)胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細(xì)胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素:實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、試驗(yàn)臺、超凈臺、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染,引起細(xì)胞的污染。
7. 抗*素耐藥性:支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性,使得治*效果變差。
8. 檢測和清理方法的局限性:一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效,導(dǎo)致難以徹底清理支原體
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有什么影響?北京細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑多少錢
細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染怎么檢測?上海細(xì)胞支原體預(yù)防現(xiàn)貨
支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括以下幾個階段:
1. 支原體檢測:在進(jìn)行去除之前,首先要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過多種方法實(shí)現(xiàn),如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。
2. 選擇合適的去除試劑:一旦確認(rèn)存在支原體污染,需要選擇一種有效的去除試劑。
3. 去除試劑的添加:根據(jù)去除試劑的說明書,將試劑添加到受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。通常,這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中。
4. 孵育:添加去除試劑后,將細(xì)胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時(shí)間和條件(如溫度、CO2濃度)應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進(jìn)行調(diào)整。
5. 監(jiān)測去除效果:在孵育過程中,定期監(jiān)測細(xì)胞的狀態(tài)和去除效果。這可能包括觀察細(xì)胞形態(tài)、生長速率的變化,以及通過顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。
6. 后續(xù)檢測:去除過程完成后,再次使用支原體檢測方法確認(rèn)污染是否已被成功。
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