細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響,具體包括:
1. 細(xì)胞生長(zhǎng)受影響:支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢,甚至停滯。
2. 細(xì)胞形態(tài)改變:支原體感*的細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)的改變,如細(xì)胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細(xì)胞功能改變:支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的代謝、增殖、分化等生理功能。
4. 細(xì)胞產(chǎn)物改變:支原體感*可能影響細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)的表達(dá)和分泌。
5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確:支原體污染會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差:支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)批次間差異大,影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。
7. 影響后續(xù)實(shí)驗(yàn):支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),如轉(zhuǎn)染、基因編輯等,可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。
8. 影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量:支原體污染會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本:支原體污染需要花費(fèi)額外的時(shí)間和成本進(jìn)行檢測(cè)、處理和重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞培養(yǎng)為什么建議使用支原體檢測(cè)?北京細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)說明書
細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染,可以采取以下一些方法嘗試去除污染:
1. 抗*素治*:使用針對(duì)支原體有效的抗*素,如四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等。根據(jù)搜索結(jié)果,可以加入高濃度抗*素進(jìn)行沖擊治*,例如慶大霉素 200ug/ml,四環(huán)素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并維持24-48小時(shí)后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。
2. 加溫處理:支原體不耐熱,可以將細(xì)胞置于41°C中處理5-10小時(shí)以殺滅支原體。但需注意,高溫也可能對(duì)細(xì)胞造成傷害,因此需要預(yù)先確定對(duì)細(xì)胞影響較小的處理時(shí)間。
3. 使用支原體清除劑:市場(chǎng)上有專門的支原體清除劑,按照產(chǎn)品說明使用。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基:如Procell支原體清*培養(yǎng)基,這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分,可以抑制支原體生長(zhǎng)并挽救珍貴細(xì)胞。
5. 物理方法:一些實(shí)驗(yàn)室采用過濾的方法,使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑,以阻止支原體的侵入。
6. 細(xì)胞傳代:在一些情況下,通過細(xì)胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。
北京細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)說明書支原體去除之后對(duì)細(xì)胞檢測(cè)有無影響?
支原體檢測(cè)的應(yīng)用場(chǎng)景非常廣*,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域:
1. 細(xì)胞培養(yǎng):在實(shí)驗(yàn)室和生物制品工廠中,細(xì)胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此,支原體檢測(cè)在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要。科研中常用等溫?cái)U(kuò)增的方法簡(jiǎn)單便捷。
2. 生物制品生產(chǎn):在生物制品的生產(chǎn)過程中,如疫苗、生物藥物等,需要確保產(chǎn)品無支原體污染,以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測(cè)。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。
一步法支原體檢測(cè)試劑盒的防污染版本通常采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)原理,通過支原體特異性引物在恒溫條件下對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè),終通過顏色變化確定樣品中是否含有支原體污染。這種方法的優(yōu)勢(shì)在于:
1. 快速檢測(cè):可以在較短的時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè),通常在60分鐘以內(nèi)。
2. 高靈敏度和特異性:等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)可以檢測(cè)到非常低濃度的支原體DNA。
3. 操作簡(jiǎn)便:不需要復(fù)雜的設(shè)備,如PCR儀或電泳設(shè)備,只需水浴鍋即可完成擴(kuò)增反應(yīng)。
4. 減少污染風(fēng)險(xiǎn):由于無需開蓋電泳,可以減少因氣溶膠造成的交叉污染。
此外,試劑盒還包含UNG(Uracil-N-Glycosylase)酶,用于防止PCR過程中的污染,UNG酶可以消化反應(yīng)液中可能存在的尿嘧啶,從而減少因污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性結(jié)果。
支原體污染之后是直接丟棄還是重新培養(yǎng)?
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測(cè)方法有多種,以下是一些常用的檢測(cè)手段:
1. 顯微鏡檢測(cè):通過相差顯微鏡觀察細(xì)胞,支原體在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間會(huì)呈現(xiàn)為暗色微小顆粒。
2. 熒光染色法:使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結(jié)合,使支原體的DNA著色,然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會(huì)在細(xì)胞周圍或附于細(xì)胞膜表面顯示為亮綠色小點(diǎn)。
3. 電鏡檢查:使用掃描電鏡或透射電鏡觀察,這是一種簡(jiǎn)便快速的方法。
4. 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR):使用特定的引物對(duì)支原體DNA進(jìn)行擴(kuò)增,是一種高靈敏度的檢測(cè)方法。
5. 等溫?cái)U(kuò)增法:基于LAMP技術(shù),室溫反應(yīng)后觀察顏色變化確認(rèn)是否有支原體污染。
一步法快速支原體檢測(cè)的原理?杭州細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染檢測(cè)試劑
支原體污染的來源有哪些?北京細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)說明書
支原體檢測(cè)的樣本既可以是細(xì)胞,也可以是培養(yǎng)基。在細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體污染是常見的問題,因此需要對(duì)細(xì)胞和培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)胞庫(kù)、病毒種子批、對(duì)照細(xì)胞以及臨床用細(xì)胞等都需要進(jìn)行支原體檢查,這通常包括培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)。同時(shí),病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體,必要時(shí),也可以采用指示細(xì)胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外,支原體檢測(cè)的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,這些培養(yǎng)基可用于檢測(cè)藥品和生物制品中的支原體。在進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí),需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長(zhǎng)的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。
因此,支原體檢測(cè)的樣本既可以是細(xì)胞,也可以是培養(yǎng)基,具體取決于檢測(cè)的目的和方法。
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