支原體污染一旦發(fā)生,不僅對細胞培養(yǎng)造成嚴重影響,甚至可能導(dǎo)致實驗結(jié)果失真。而且支原體污染在細胞培養(yǎng)實驗中相當(dāng)常見。因此,預(yù)防措施是確保細胞培養(yǎng)環(huán)境和實驗結(jié)果可靠性的重要手段。
01/ 良好的無菌技術(shù)及實驗操作,保證操作不會引入新的污染
02/ 保持實驗空間的清潔
03/ 確保從可靠的來源獲取細胞,減少不同細胞之間的交叉?zhèn)魅?/span>
04/ 防止交叉污染
05/ 減少氣溶膠生成
06/ 謹慎使用抗*素
07/ 定期支原體篩查
08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細胞
09/ 保持良好的記錄
支原體檢測方法LAMP法?廣州細胞培養(yǎng)支原體污染檢測試劑
細胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點:
1. 無細胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細胞壁的微生物,這使得許多作用于細胞壁的抗*素對支原體無效。
2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見,因此細胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細胞培養(yǎng)物、細胞懸液、細胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 :支原體污染源包括細胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素:實驗室環(huán)境、試驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染,引起細胞的污染。
7. 抗*素耐藥性:支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性,使得治*效果變差。
8. 檢測和清理方法的局限性:一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效,導(dǎo)致難以徹底清理支原體
溫州支原體檢測如何取樣支原體檢測實驗的方法?
支原體檢測實驗方法需要考慮以下幾個關(guān)鍵點:
1. 樣本的采集與處理:確保樣本的采集和處理過程符合無菌操作規(guī)范,避免交叉污染。
2. 實驗操作的標(biāo)準化:制定詳細的實驗操作流程,包括樣本接種、培養(yǎng)條件、觀察時間點等,以保證實驗的可重復(fù)性和準確性。
3. 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基:根據(jù)支原體的特性選擇合適的培養(yǎng)基,如支原體肉湯4. 培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,并確保培養(yǎng)基的靈敏度和特異性。
5. 設(shè)置對照組:實驗中應(yīng)包括陽性對照和陰性對照,以驗證實驗方法的有效性和排除假陽性或假陰性結(jié)果。
一步法快速支原體檢測的原理主要基于等溫擴增技術(shù),這是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。以下是具體的步驟和原理:
1. 等溫擴增技術(shù):一步法快速支原體檢測試劑盒利用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification,環(huán)介導(dǎo)等溫擴增)技術(shù)或類似的等溫擴增技術(shù)。這些技術(shù)允許在恒定溫度下進行DNA的快速擴增,通常在60-65°C之間。
2. 特異性引物:該方法使用設(shè)計好的特異性引物,這些引物靶向支原體DNA的保守區(qū)域。引物的設(shè)計確保了擴增過程的特異性,從而減少非目標(biāo)序列的擴增。
3. 快速擴增:在適宜的條件下,等溫擴增技術(shù)可以在15至60分鐘內(nèi)實現(xiàn)高達10^9至10^10倍的核酸擴增,從而快速檢測出支原體的存在。
4. 顏色變化指示:一步法試劑盒中通常包含有顏色指示劑,當(dāng)支原體DNA被擴增時,反應(yīng)液的顏色會發(fā)生變化,從而可以通過肉眼直接觀察到檢測結(jié)果。例如,從藍紫色變?yōu)樘焖{色,表示樣本中存在支原體。
5. 操作簡便:一步法支原體檢測不需要復(fù)雜的設(shè)備,通常只需要水浴鍋或PCR儀即可完成操作,使得檢測過程更加簡便快捷。
細胞培養(yǎng)中支原體預(yù)防措施。
LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification),是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。它由日本學(xué)者Notomi于2000年開發(fā)。LAMP法檢測有以下特性:
快速高效:LAMP技術(shù)可以在1小時內(nèi)把幾拷貝的目的序列迅速擴增到10^9^~10^10^拷貝,擴增效率高。
簡便性:LAMP技術(shù)不需要進行模板的預(yù)變性,減少了PCR技術(shù)升降溫帶來的影響以及對昂貴、精密實驗儀器的要求,同時擴增效率高,可以在較短時間內(nèi)完成檢測。
LAMP法因其快速、高效、特異、靈敏和經(jīng)濟等優(yōu)點,已經(jīng)應(yīng)用于病原菌、寄生蟲、病毒、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測等領(lǐng)域,并且還將廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測、食源安全等領(lǐng)域,具有更為廣闊的發(fā)展應(yīng)用前景。
支原體檢測有哪些方法?廣州細胞培養(yǎng)支原體污染檢測試劑
細胞培養(yǎng)中,支原體檢測的重要性?廣州細胞培養(yǎng)支原體污染檢測試劑
支原體檢測的樣本既可以是細胞,也可以是培養(yǎng)基。在細胞培養(yǎng)中,支原體污染是常見的問題,因此需要對細胞和培養(yǎng)基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查,這通常包括培養(yǎng)法和指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)。同時,病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體,必要時,也可以采用指示細胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外,支原體檢測的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,這些培養(yǎng)基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時,需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上。
因此,支原體檢測的樣本既可以是細胞,也可以是培養(yǎng)基,具體取決于檢測的目的和方法。
廣州細胞培養(yǎng)支原體污染檢測試劑