深圳anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠哪個公司好用

來源： 發(fā)布時間：2024-06-13

免疫共沉淀分析（Co-IP）實驗原理與IP十分類似，基本的技術都是采用目標抗原特異性的固相化抗體；但IP的目標是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結合的蛋白質或配體。

在Co-IP實驗中，已知抗原稱為誘餌蛋白，與之結合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復雜的伴侶蛋白、信號分子、結構蛋白、輔助因子等，蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間?；镜腃o-IP實驗方案與IP相同，實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是，還有許多其他因素需要考慮，例如，結合和洗滌條件的優(yōu)化，優(yōu)化時，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。
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ChIP（染色質免疫沉淀）實驗是一種強大的技術，用于研究蛋白質與DNA之間的相互作用，尤其是在轉錄調控、DNA修復、復制以及表觀遺傳學領域。然而，像所有實驗技術一樣，ChIP實驗也有其優(yōu)點和缺點。
ChIP實驗的優(yōu)點：
1. 體內反應的反映：ChIP提供了一種在體內研究蛋白質與DNA相互作用的方法，能夠真實、完整地反映結合在DNA序列上的靶蛋白的調控信息。
2. 全基因組覆蓋：ChIP技術可以覆蓋整個基因組，提供關于蛋白質-DNA相互作用的視圖。
3. 適用于多種蛋白質：ChIP可以用來研究組蛋白修飾、轉錄因子以及其他DNA結合蛋白。
ChIP實驗的缺點：
1. 實驗步驟繁瑣。
2. 需要大量起始材料：ChIP實驗通常需要大量的細胞或組織作為起始材料。
3. 交聯的影響：使用交聯劑可能會改變蛋白質的結構，從而影響抗體的識別和蛋白質-DNA的相互作用。
4. 染色質碎裂的分辨率：染色質碎裂的效率和分辨率直接影響ChIP的準確性，需要優(yōu)化以獲得結果。
5. 抗體質量：抗體的質量對實驗結果至關重要，但高質量、特異性強的抗體可能難以獲得或成本較高。
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免疫沉淀實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結構  (直徑 50-150 μm)  可以結合抗體  (繼而結合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質相互接觸，具有更高的結合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力，但每體積的磁珠數量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。

Co-IP的實驗步驟：
1. 細胞裂解：首先，細胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質。
2. 抗體結合：然后，將特異性抗體（針對已知蛋白質之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會特異性地結合到目標蛋白（誘餌蛋白）上。
3. 免疫復合物形成：抗體與目標蛋白結合后，形成免疫復合物。
4. 沉淀：接著，使用蛋白A或蛋白G結合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲免疫復合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結合，從而拉下抗體以及與之結合的目標蛋白和任何相關的相互作用蛋白。
5. 洗滌：捕獲的免疫復合物被洗滌以去除未特異性結合的蛋白質。
6. 洗脫和分析：免疫復合物被洗脫并進行進一步的分析，如Western blot（WB）或質譜分析，以鑒定相互作用的蛋白質。
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免疫沉淀技術的實驗設計通常包括以下幾個關鍵步驟：
1. 目標蛋白質的選擇：
2. 抗體的選擇：選擇特異性強、親和力高的抗體來捕獲目標蛋白質
3. 樣本的準備：收集和準備細胞或組織樣本。
4. 蛋白質的裂解和釋放：選擇合適的裂解條件，如pH值、離子強度、去污劑等。
5. 蛋白質濃度的測定：確定裂解液中蛋白質的濃度，以便于后續(xù)步驟的標準化。
6. 免疫沉淀的操作：將特異性抗體與裂解液混合，并在適宜的條件下孵育，以形成抗體-抗原復合物。
7. 非特異性結合的減少：通過預純化步驟去除可能的非特異性結合蛋白。
8. 洗滌：多次洗滌以去除未結合的蛋白質和雜質。
9. 目標蛋白質的洗脫：使用適當的緩沖液洗脫抗體-抗原復合物。
10. 后續(xù)分析：對洗脫的蛋白質進行進一步分析，如Western Blot.
11. 對照實驗：設計適當的正對照和負對照，以評估實驗的特異性和敏感性。
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免疫沉淀技術RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）是一種用于研究細胞內RNA與蛋白質相互作用的技術。RIP技術可以幫助我們了解轉錄后調控網絡的動態(tài)過程，并發(fā)現miRNA等非編碼RNA的調節(jié)靶點。
RIP技術的原理是利用針對特定RNA結合蛋白的抗體，將細胞內的RNA-蛋白質復合物沉淀下來。然后，可以通過分離純化，對這些復合物中的RNA進行檢測，如qPCR驗證或測序分析。
表觀遺傳學和RNA生物學領域對不同RNA作用和功能的關注增加。RNA-蛋白質相互作用能夠調控mRNA和非編碼RNA的功能。對RNA潛能的這一新認識帶動了新方法的發(fā)展，使研究人員能夠定位 RNA-蛋白質相互作用。
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世途科生物簡介：

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