上海細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除貨期

來源： 發(fā)布時(shí)間：2024-06-11

支原體污染的來源主要包括以下幾個(gè)方面：
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中可能存在支原體污染源，如空氣中的塵埃、其他培養(yǎng)物中的支原體污染等。
2. 實(shí)驗(yàn)操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體，造成細(xì)胞培養(yǎng)的污染。
3. 培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)材料如果受到支原體污染，也會導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染。
4. 細(xì)胞交叉污染，即使用已受污染的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，可能會污染其他細(xì)胞。
5. 實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染，如未徹底消毒滅菌的實(shí)驗(yàn)器材。
6. 人體是某些支原體的正常菌群，因此操作人員的疏失也可能成為污染源。
7. 細(xì)胞庫管理不善，造成實(shí)驗(yàn)室間的相互污染。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)菌、酵母或霉菌污染在光學(xué)顯微鏡下可見，但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下通常不可見，必須通過特定的檢測方法進(jìn)行檢測
支原體污染如何預(yù)防？上海細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除貨期

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支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍的問題之一，細(xì)胞庫中或正在使用的細(xì)胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng)：支原體的污染會阻礙細(xì)胞生長和增殖 
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達(dá)、細(xì)胞信號傳導(dǎo)和形態(tài) 
04/ 損害膜和細(xì)胞器 
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 
06/ 時(shí)間、金錢和有價(jià)值的細(xì)胞丟失：支原體的污染會導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失以及研究時(shí)間損失
07/ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠性 
08/ 生物安全問題
杭州細(xì)胞支原體檢測時(shí)間支原體的檢測方法有哪些？

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qPCR法，即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Quantitative Polymerase Chain Reaction）法，是一種高度靈敏和特異的分子生物學(xué)技術(shù)，用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中，qPCR法的原理主要包括以下幾個(gè)步驟：
1. DNA提?。菏紫葟拇郎y樣本中提取DNA，這可能包括細(xì)胞培養(yǎng)上清液或組織樣本中的支原體DNA。
2. 設(shè)計(jì)特異性引物：針對支原體的保守DNA序列，如16S rRNA基因，設(shè)計(jì)特異性的DNA引物。
3. 熒光標(biāo)記探針：使用熒光標(biāo)記的探針，該探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)，能夠在PCR擴(kuò)增過程中與擴(kuò)增的DNA結(jié)合。
4. Ct值確定：Ct值（閾值循環(huán)數(shù)）是指在PCR反應(yīng)中，熒光信號強(qiáng)度超過預(yù)定閾值的循環(huán)次數(shù)。Ct值越低，表示樣本中支原體DNA的量越多。
5. 定量分析：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或相對定量法，將Ct值轉(zhuǎn)換為支原體DNA的定量結(jié)果。
qPCR法的優(yōu)勢在于其高靈敏度和特異性，能夠檢測到非常低水平的支原體污染，并且可以在短時(shí)間內(nèi)提供結(jié)果，這對于需要快速檢測的生物制品生產(chǎn)和細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量控制非常重要

細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能由以下原因引起：
1. 擴(kuò)增產(chǎn)物污染：PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理，極微量的污染就可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
2. 引物設(shè)計(jì)不當(dāng)：引物設(shè)計(jì)不夠特異性，可能會與非目標(biāo)序列發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
3. 試劑質(zhì)量問題：使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質(zhì)量不佳，可能引起非特異性擴(kuò)增或假陽性結(jié)果。
4. 操作技術(shù)問題：實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范，如混合樣本、標(biāo)簽錯(cuò)誤或樣本標(biāo)識不清等，可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
5. PCR反應(yīng)條件設(shè)置不當(dāng)：不恰當(dāng)?shù)腜CR反應(yīng)條件，如溫度和時(shí)間選擇不當(dāng)，可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
6. DNA污染：PCR環(huán)境中的DNA污染會干擾結(jié)果，導(dǎo)致假陽性
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體預(yù)防措施。

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支原體檢測中的PCR法和LAMP方法各有其優(yōu)勢和劣勢，以下是兩種方法的比較：

PCR法
優(yōu)勢:
1.高靈敏度：PCR法可以擴(kuò)增支原體DNA，具有很高的靈敏度。
2.操作簡便：PCR操作相對簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，速度快，通常3個(gè)小時(shí)左右即可得到結(jié)果。
3.可靠性：PCR法已成為日常細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)的可靠方法，是細(xì)胞樣本庫保護(hù)細(xì)胞的方法。
劣勢:
1. 樣品量需求：相對于某些快速檢測方法，PCR可能需要較多的樣品量。
2. 檢測周期：盡管PCR法相對快速，但在某些情況下，檢測周期可能較長。
LAMP法
優(yōu)勢:
1. 設(shè)備簡單：只需要一個(gè)穩(wěn)定的恒溫環(huán)境，如恒溫水浴或熱擬溫器，不需要復(fù)雜的溫度控制設(shè)備。
2. 高特異性：LAMP技術(shù)采用多個(gè)特異性引物，提供了較高的特異性。
3. 結(jié)果可視化：LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物可形成肉眼觀察的顏色產(chǎn)物，有助于直接觀察擴(kuò)增結(jié)果。
劣勢:
1. 引物設(shè)計(jì)復(fù)雜：需要設(shè)計(jì)多個(gè)引物，包括外部引物、內(nèi)部引物和環(huán)引物，引物設(shè)計(jì)較為復(fù)雜。
2. 避免污染：由于沒有封閉系統(tǒng)，避免污染造成的假陽性是一個(gè)問題。
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支原體污染一旦發(fā)生，不僅對細(xì)胞培養(yǎng)造成嚴(yán)重影響，甚至可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果失真。而且支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中相當(dāng)常見。因此，預(yù)防措施是確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的重要手段。
01/ 良好的無菌技術(shù)及實(shí)驗(yàn)操作，保證操作不會引入新的污染
02/ 保持實(shí)驗(yàn)空間的清潔
03/ 確保從可靠的來源獲取細(xì)胞，減少不同細(xì)胞之間的交叉?zhèn)魅?/span>
04/ 防止交叉污染
05/ 減少氣溶膠生成
06/ 謹(jǐn)慎使用抗*素
07/ 定期支原體篩查
08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細(xì)胞
09/ 保持良好的記錄
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上海世途科生物(CYTOCH)是一家生命科學(xué)上游工具類企業(yè)。聚焦于細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的化學(xué)技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)與生產(chǎn)，產(chǎn)品覆蓋細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品如胎牛血清，支原體檢測，支原體去除試劑等，細(xì)胞轉(zhuǎn)染產(chǎn)品如轉(zhuǎn)染試劑，及細(xì)胞檢測產(chǎn)品如增殖凋亡檢測，報(bào)告基因等多個(gè)科研場景，給終端客戶提供良好的產(chǎn)品以及服務(wù)。

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標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體