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來源： 發(fā)布時間：2024-06-06

免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準(zhǔn)備
2. 細(xì)胞裂解：使用裂解緩沖液（含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解）裂解細(xì)胞，釋放蛋白質(zhì)。
3. 蛋白質(zhì)濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。
4. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
5. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)充分結(jié)合。
6. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。
7. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，通常需要多次洗滌固相支持物。
8. 洗脫：使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復(fù)合物。
9. 后續(xù)分析：對洗脫的蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質(zhì)譜分析等，以進(jìn)一步分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。
10. 對照實(shí)驗(yàn)：包括正對照（已知能沉淀目標(biāo)蛋白的抗體）和負(fù)對照（非特異性抗體或無抗體）以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的特異性。
免疫沉淀技術(shù)IP實(shí)驗(yàn)步驟。深圳anti Flag免疫沉淀磁珠多少錢

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免疫沉淀純化所得抗原量低有多種原因，
A. 純化所得抗原量低
1. 抗原結(jié)合水平低
IP 應(yīng)用中出現(xiàn)低抗原結(jié)合水平的可能原因有很多，結(jié)合反應(yīng)所使用的溶液是重要原因之一。必須使用適合的緩沖液，有特定的pH和鹽濃度，可能還需要添加互作所需的輔助因子。IP 或Co-IP 中用于純化的抗體是影響得率的另一個重要因素。如果抗體本身易失活或與抗原結(jié)合微弱，則可能很難找到足夠溫和的條件，即能產(chǎn)生結(jié)合，又能保證在孵育和洗滌過程中結(jié)合可以穩(wěn)定保持。
2. 抗原洗脫水平低
在某些情況下，抗原與抗體或結(jié)合蛋白結(jié)合之間可能會發(fā)生極強(qiáng)的相互作用，傳統(tǒng)的洗脫緩沖液無法將其破壞。如果需要使用溫和洗脫緩沖液收集功能性抗原，則上述矛盾尤為突出。

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    免疫沉淀（immunoprecipitation）是指利用抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性，將抗原（常為靶蛋白）從混合體系沉淀下來，初步分離靶蛋白的一種方法。免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）是一種在體外探測兩個蛋白分子間是否存在特異性相互作用的一種方法。其原理非常簡單，如果兩個蛋白在體外體系能夠發(fā)生特異性相互作用的話，那么當(dāng)用一種蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀時，另一個蛋白也會被同時沉淀下來。與酵母雙雜交技術(shù)不同，免疫共沉淀技術(shù)所利用的是抗原和抗體間的免疫反應(yīng)，是一種基于體外非細(xì)胞的環(huán)境中研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用的方法。

染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術(shù)是目前公認(rèn)的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達(dá)機(jī)制研究中不可或缺的技術(shù)之一。
它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復(fù)合物，并將其切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法（抗體親和）沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA，通過對目的片段的純化與后期檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。
這項(xiàng)技術(shù)通過蛋白質(zhì)與DNA互作來分析目標(biāo)基因活性以及已知蛋白質(zhì)的靶基因，被廣泛應(yīng)用于體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子與靶基因啟動子上特異核苷酸序列結(jié)合方面的研究。該技術(shù)常與DNA芯片和分子克隆技術(shù)相結(jié)合。
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免疫沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。
1. 特異性：抗體應(yīng)當(dāng)對目標(biāo)蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
2. 親和力：抗體對目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高，以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。
3. 抗體類型：單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實(shí)驗(yàn)。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性，而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。
4. 應(yīng)用驗(yàn)證：選擇已經(jīng)過免疫沉淀（Co-IP）或相關(guān)應(yīng)用（如Western blot, IHC）驗(yàn)證的抗體，這增加了實(shí)驗(yàn)成功的可能性。
5. 供應(yīng)商信息：選擇信譽(yù)良好的抗體供應(yīng)商，并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評價，以幫助做出決策。
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免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別？深圳anti Flag免疫沉淀磁珠多少錢

真核生物的基因組 DNA 以染色質(zhì)（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白質(zhì)與 DNA 在染色質(zhì)環(huán)境中的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑，而染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術(shù)是目前公認(rèn)的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達(dá)機(jī)制研究中不可或缺的技術(shù)之一。
它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復(fù)合物，并將其切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法（抗體親和）沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA，通過對目的片段的純化與后期檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。
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世途科生物簡介：

上海世途科生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的，為全球用戶提供生物試劑的生命科學(xué)企業(yè)。世途科生物（CYTOCH）匯集了一支由海內(nèi)外KOL組成的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，他們在生物和化學(xué)領(lǐng)域擁有相當(dāng)豐富的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，通過將化學(xué)與生物技術(shù)相結(jié)合，致力于現(xiàn)有技術(shù)難點(diǎn)突破、新技術(shù)研究，為相關(guān)科學(xué)研究者提供思路和解決辦法。

憑借著強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量管理，通過產(chǎn)學(xué)研合作，加快客戶科研成果的轉(zhuǎn)化，不斷推動行業(yè)的發(fā)展。

標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀