南京anti DYKDDDDK免疫沉淀實驗視頻

來源： 發(fā)布時間：2024-06-05

免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）是一種利用抗體與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，從復雜樣本中分離和純化目標蛋白質(zhì)的實驗方法。這項技術在生物醫(yī)學研究中有著廣泛的應用場景，以下是一些主要的應用領域：
1. 蛋白質(zhì)相互作用分析：通過免疫沉淀技術，研究人員可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，揭示蛋白質(zhì)復合物的組成以及它們在細胞內(nèi)的功能和調(diào)控機制。
2. 抗體藥物開發(fā)：免疫沉淀技術可以用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結(jié)合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性，指導抗體藥物的設計和優(yōu)化。
3. 蛋白質(zhì)表達水平分析：通過比較不同條件下的免疫沉淀結(jié)果，可以評估目標蛋白的相對量，進而研究蛋白質(zhì)的表達調(diào)控。
4. 染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）：這是一種特殊的免疫沉淀技術，用于研究蛋白質(zhì)與DNA的相互作用，如轉(zhuǎn)錄因子或組蛋白修飾與基因組特定區(qū)域的結(jié)合情況。
5. RNA免疫沉淀（RIP）：類似于ChIP，RIP用于研究RNA結(jié)合蛋白與RNA分子之間的相互作用。
免疫沉淀技術ChIP是什么？南京anti DYKDDDDK免疫沉淀實驗視頻

南京anti DYKDDDDK免疫沉淀實驗視頻,免疫沉淀

免疫沉淀實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
上海蛋白免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨免疫沉淀純化所得抗原量低是什么原因？

南京anti DYKDDDDK免疫沉淀實驗視頻,免疫沉淀

免疫沉淀（Co-IP）實驗中抗體的選擇非常關鍵，因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。
1. 特異性：抗體應當對目標蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導致假陽性結(jié)果。
2. 親和力：抗體對目標蛋白的親和力要足夠高，以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標蛋白。
3. 抗體類型：單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性，而多克隆抗體可能提供更強的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。
4. 應用驗證：選擇已經(jīng)過免疫沉淀（Co-IP）或相關應用（如Western blot, IHC）驗證的抗體，這增加了實驗成功的可能性。
5. 供應商信息：選擇信譽良好的抗體供應商，并查看供應商提供的技術數(shù)據(jù)和客戶評價，以幫助做出決策。

RIP實驗步驟通常包括：
1. 細胞收集與交聯(lián)：培養(yǎng)細胞至適當密度。使用交聯(lián)劑（如甲醛）進行交聯(lián)，以固定蛋白質(zhì)-RNA復合物。
2. 細胞裂解：收集細胞并進行裂解，釋放RNA-蛋白質(zhì)復合物。在裂解過程中添加蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解。
3. 超聲處理：使用超聲波破壞細胞，獲得更小的染色質(zhì)片段，這有助于后續(xù)步驟中抗體的接觸。
4. 除去細胞碎片：通過離心去除細胞碎片和未裂解的細胞，收集含RNA-蛋白質(zhì)復合物的上清液。
5. 免疫沉淀：將針對特定RNA結(jié)合蛋白（RBP）的抗體加入到上清液中。孵育一段時間，使抗體與目標蛋白充分結(jié)合。
6. 捕獲免疫復合物：添加蛋白A或蛋白G結(jié)合的磁珠或瓊脂糖珠。孵育使抗體-蛋白質(zhì)-RNA復合物與珠子結(jié)合。
7. 洗滌：多次洗滌珠子以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和RNA。
8. 洗脫與逆轉(zhuǎn)交聯(lián)：使用適當?shù)木彌_液洗脫免疫復合物。使用蛋白酶K處理樣品以逆轉(zhuǎn)交聯(lián)，釋放RNA。
9. RNA提取與純化：從免疫沉淀樣品中提取RNA，并進行純化。
10. RNA分析：使用qPCR、Northern blot、RNA-Seq等方法分析沉淀的RNA，以確定與目標蛋白相互作用的RNA種類。
免疫沉淀技術RIP的實驗方法。

南京anti DYKDDDDK免疫沉淀實驗視頻,免疫沉淀

Co-IP的優(yōu)勢：
1. 生理相關性：Co-IP可以在接近生理條件的條件下捕獲蛋白質(zhì)相互作用。
2. 特異性：使用特異性抗體可以提高實驗的特異性。
3. 廣泛應用：Co-IP技術適用于多種樣本類型，包括細胞培養(yǎng)、組織樣本等。
Co-IP的局限性：
1. 抗體依賴性：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能得到假陽性或假陰性結(jié)果。
2. 非特異性結(jié)合：可能存在非特異性結(jié)合問題，需要仔細的實驗設計和對照來控制。
3. 技術挑戰(zhàn)：對于低豐度或弱相互作用的蛋白質(zhì)，Co-IP可能面臨技術挑戰(zhàn)。
免疫沉淀技術的實驗方法。北京anti Flag免疫沉淀磁珠原理

免疫沉淀技術ChIP的優(yōu)缺點是什么？南京anti DYKDDDDK免疫沉淀實驗視頻

“免疫沉淀”一般是指采用固定在固相支持物上的結(jié)合蛋白，進行小規(guī)模的蛋白質(zhì)親和純化的實驗。更確切地說，IP是采用固定在微珠支持物(一般是瓊脂糖樹脂)上的特定抗體，從復雜的混合物中，純化單一抗原的實驗。固定化蛋白質(zhì)復合物的組裝既可以分步進行，也可以一步完成。

常見的加樣順序：抗體和樣本(如細胞裂解物)一起孵育，然后加入親和微珠，用于捕獲抗體-抗原復合物。也可以將抗體和微珠(通過抗體結(jié)合蛋白，如蛋白A、G或A/G等，直接或間接結(jié)合抗體)先進行孵育，然后再加入含有抗原的樣本。當抗原、抗體和固相支持物產(chǎn)生結(jié)合以后，充分洗滌微珠，再采用適當?shù)南疵摼彌_液從支持物上洗脫抗原。
南京anti DYKDDDDK免疫沉淀實驗視頻

世途科生物CYTOCH立足于科研，憑借著強大的研發(fā)實力和嚴謹?shù)馁|(zhì)量管理，通過與學術界和產(chǎn)業(yè)界的KOL合作，加快客戶科研成果的轉(zhuǎn)化速度，不斷推動行業(yè)的發(fā)展。CYTOCH持續(xù)關注生命健康相關的科學研究，開拓化學與生物結(jié)合的新思路，為全球用戶供應質(zhì)量的產(chǎn)品。CYTOCH將攜手客戶共同探索生命與健康的奧秘，為人類健康做出更大的貢獻。一直以來，中國的生物試劑市場被國外品牌主導，國內(nèi)品牌往往只能在低利潤和低技術含量的市場中苦苦競爭，品牌間的內(nèi)卷導致其無法專注產(chǎn)品本身質(zhì)量而始終無法突破國外品牌的市場格局。CYTOCH致力于成為客戶信賴的中國品牌。