細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的。較好是在靠前次實(shí)驗(yàn)前做一個預(yù)實(shí)驗(yàn)，比如：HeLa，293，CHO，COS7，MCF－7，HepG2等細(xì)胞，是否加血清，對不同的細(xì)胞是有不同的影響的，有些細(xì)胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時(shí)左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因?yàn)槠胀ㄞD(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡。轉(zhuǎn)染時(shí)不加血清是防止血清的干擾作用，轉(zhuǎn)染后可適時(shí)加入。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細(xì)胞死亡。可實(shí)時(shí)觀察1/5細(xì)胞變圓的時(shí)候加入血清。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時(shí)候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，盡量使用開封半年內(nèi)的，因?yàn)檫^了半年后，就算沒有過失效期，但是細(xì)胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時(shí)加入血清，會導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時(shí)換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗(yàn)，其實(shí)也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時(shí)候，較好不要換液，不要打擾細(xì)胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時(shí)候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，盡量使用開封半年內(nèi)的，因?yàn)檫^了半年后，就算沒有過失效期，但是細(xì)胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時(shí)加入血清，會導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時(shí)換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗(yàn)，其實(shí)也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時(shí)候，較好不要換液，不要打擾細(xì)胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的常用方法：細(xì)菌轉(zhuǎn)染：原理：對于用脂質(zhì)體不能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，可以采用細(xì)菌轉(zhuǎn)染。可用于蛋白質(zhì)過表達(dá)或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞、原代細(xì)胞的穩(wěn)定性轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)步驟：通過基因克隆生成重組細(xì)菌→采用非細(xì)菌法轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞系，擴(kuò)增并分離得到重組細(xì)菌顆?！兓⒌味?xì)菌液→轉(zhuǎn)導(dǎo)目的細(xì)胞（含有細(xì)菌特異性的受體）→去除培養(yǎng)物中的細(xì)菌，并加入新鮮培養(yǎng)基→分析細(xì)胞瞬時(shí)基因表達(dá)或沉默情況。蛋白表達(dá)和培養(yǎng)基的選擇哺乳動物細(xì)胞系合成可溶的。北京正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家推薦如何有效提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：1.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法...

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：培養(yǎng)基中的物品物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細(xì)胞。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，因?yàn)檫@些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。珠海正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨細(xì)胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。5.加入混合液，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時(shí)。6.到時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時(shí)在一般實(shí)驗(yàn)室中很難...

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場強(qiáng)度要合適合適的電場強(qiáng)度對于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要，電場強(qiáng)度不能過高，過高會增加細(xì)胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場強(qiáng)值，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場強(qiáng)度。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）。因?yàn)樘幱趯?shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差，電轉(zhuǎn)后，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng)，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA到時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液。廣州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家推薦細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩，。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。(5)加入混合液，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時(shí)。(6)到時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)。對于轉(zhuǎn)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時(shí)候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，盡量使用開封半年內(nèi)的，因?yàn)檫^了半年后，就算沒有過失效期，但是細(xì)胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時(shí)加入血清，會導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時(shí)換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗(yàn)，其實(shí)也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時(shí)候，較好不要換液，不要打擾細(xì)胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前實(shí)驗(yàn)室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細(xì)胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時(shí)間一般不超過24小時(shí)。常用細(xì)胞類型：cos-7、BHK、NIH3T3、Hela等2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時(shí)建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。一般...

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場強(qiáng)度要合適合適的電場強(qiáng)度對于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要，電場強(qiáng)度不能過高，過高會增加細(xì)胞的死亡率；也不能過低，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場強(qiáng)值，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場強(qiáng)度。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）。因?yàn)樘幱趯?shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差，電轉(zhuǎn)后，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng)，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA瞬時(shí)和穩(wěn)定表達(dá)DNA轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)可以在1－4天內(nèi)檢測到。鄭州細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理、操作步驟以及小技巧：一、...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1.如為貼壁生長細(xì)胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，必須應(yīng)用胰酶處理成單細(xì)胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，轉(zhuǎn)染當(dāng)日的細(xì)胞密度以70-90%（貼壁細(xì)胞）或2×106-4×106細(xì)胞/ml（懸浮細(xì)胞）為宜，較好在轉(zhuǎn)染前4h換一次新鮮培養(yǎng)液。2.用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA必須無蛋白質(zhì)，無RNA和其他化學(xué)物質(zhì)的污染，OD260/280比值應(yīng)在1.8以上。3.培養(yǎng)基中的血清在開始準(zhǔn)備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時(shí)要使用無血清的培養(yǎng)基，因?yàn)檠鍟绊憦?fù)合物的形成。其實(shí)，只要在DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)不含血清，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。有血清時(shí)的轉(zhuǎn)染 血清一度曾被認(rèn)為會降低轉(zhuǎn)染效率。北京...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染，你至少要掌握以下幾點(diǎn)：主要有下面幾種方法：：化學(xué)法：磷酸鈣法、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質(zhì)體法；物理法：電穿孔法、顯微注射法、顆粒傳遞法；細(xì)菌介導(dǎo)法：逆轉(zhuǎn)錄細(xì)菌、腺細(xì)菌A.陽離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。特點(diǎn)：簡單通用，適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清，轉(zhuǎn)染效率隨細(xì)胞類型變化大。由于脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會遠(yuǎn)大于懸浮細(xì)胞，所以貼壁比懸浮轉(zhuǎn)染效率要高。懸浮細(xì)胞建議使用電穿孔法。B.電穿孔法：利用高壓電脈沖對細(xì)胞膜的干擾，使其形成利于核酸進(jìn)入的微孔。在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。蕪湖細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家推薦細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注...

轉(zhuǎn)染方式：細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成，這對大分子物質(zhì)來說是個不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也帶負(fù)電荷。為了使核酸穿過細(xì)胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù)，大致分為三類：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷。生物方法---利用基因工程細(xì)菌轉(zhuǎn)染非細(xì)菌基因到細(xì)胞中。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時(shí)的孔從而導(dǎo)入DNA。然而，沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對正常生理學(xué)的影響較小，并且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)。細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時(shí)間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)簡介實(shí)驗(yàn)步驟：1、細(xì)胞傳代(1)試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。(2)棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液，消化1分鐘(37。C，5%CO2)。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。(5)用頭多次吹吸，使細(xì)胞完全分散開。(6)將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm離心5min。(7)用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇0.8X106個細(xì)胞加入一個35mm培養(yǎng)皿。(8)將合適體積完全...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1.培養(yǎng)基中的物品物品是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。這時(shí)候可以選擇Entranster轉(zhuǎn)染試劑，非脂質(zhì)體試劑，培養(yǎng)基可加物品，避免了細(xì)胞染菌。2.設(shè)置陽性對照和陰性對照。3.一般在轉(zhuǎn)染24-48h，靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?4-48h后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測實(shí)驗(yàn)。4.如若建立穩(wěn)定的細(xì)胞系，則可對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物，常用的真核表達(dá)基因載體的標(biāo)志物有潮霉素和新霉素等。細(xì)胞轉(zhuǎn)染是完成這一過程的...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：血清A、DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)不能含血清，因?yàn)檠鍟绊憦?fù)合物的形成。B、一般細(xì)胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時(shí)沒問題，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認(rèn)為會降低轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進(jìn)行優(yōu)化。C、對于對血清缺乏比較敏感的細(xì)胞，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑。有條件的話，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細(xì)胞兩遍，注意洗的時(shí)候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細(xì)胞而是轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板讓液體滾動在細(xì)胞表面。如果洗的太厲害，細(xì)胞又損失一部分，加了脂質(zhì)體后，細(xì)胞受...

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：有血清時(shí)的轉(zhuǎn)染血清一度曾被認(rèn)為會降低轉(zhuǎn)染效率，但只要在DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)不含血清，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。轉(zhuǎn)染過程在兩步中需要使用培養(yǎng)基做為稀釋液：在DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物準(zhǔn)備過程以及復(fù)合物同細(xì)胞接觸過程。在開始準(zhǔn)備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時(shí)要使用無血清的培養(yǎng)基，因?yàn)檠鍟绊憦?fù)合物的形成。但在復(fù)合物形成后，在加入細(xì)胞中前可以加入血清。陽離子脂質(zhì)體和DNA的較佳量在使用血清時(shí)會有所不同，因此如果你想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進(jìn)行優(yōu)化。大部分細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個小時(shí)內(nèi)保持健康。對于對血清缺乏比較敏感的細(xì)胞，可以使用一些營養(yǎng)豐富的無血清培...

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測：基因的瞬時(shí)表達(dá)在24-72小時(shí)內(nèi)就結(jié)束了。這種快速的瞬時(shí)表達(dá)非常適用于驗(yàn)證質(zhì)粒表達(dá)和監(jiān)測轉(zhuǎn)染步驟的效率?？梢允褂脠?bào)告基因來確定優(yōu)化條件，其表達(dá)蛋白易檢測，在目的細(xì)胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報(bào)告基因包括氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（CAT），綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）?？梢允褂煤唵蔚姆峭凰胤椒z測b-gal的表達(dá)以測定轉(zhuǎn)染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質(zhì)粒包含CMV啟動子調(diào)控下的LacZ基因，轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞內(nèi)后可以直接表達(dá)bgal。結(jié)合簡單的檢測步驟，可以做為監(jiān)測轉(zhuǎn)染條件的一種方便靈敏的方法。一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，...

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測：基因的瞬時(shí)表達(dá)在24-72小時(shí)內(nèi)就結(jié)束了。這種快速的瞬時(shí)表達(dá)非常適用于驗(yàn)證質(zhì)粒表達(dá)和監(jiān)測轉(zhuǎn)染步驟的效率?？梢允褂脠?bào)告基因來確定優(yōu)化條件，其表達(dá)蛋白易檢測，在目的細(xì)胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報(bào)告基因包括氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（CAT），綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）?？梢允褂煤唵蔚姆峭凰胤椒z測b-gal的表達(dá)以測定轉(zhuǎn)染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質(zhì)粒包含CMV啟動子調(diào)控下的LacZ基因，轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞內(nèi)后可以直接表達(dá)bgal。結(jié)合簡單的檢測步驟，可以做為監(jiān)測轉(zhuǎn)染條件的一種方便靈敏的方法這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時(shí)候轉(zhuǎn)染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，盡量使用開封半年內(nèi)的，因?yàn)檫^了半年后，就算沒有過失效期，但是細(xì)胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時(shí)加入血清，會導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時(shí)換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗(yàn)，其實(shí)也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時(shí)候，較好不要換液，不要打擾細(xì)胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入...

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：用于蛋白生產(chǎn)的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染可以在添加有血清或無血清培養(yǎng)基中進(jìn)行。但更傾向于使用無血清培養(yǎng)基表達(dá)蛋白，因?yàn)檠宓鞍讜蓴_下游表達(dá)蛋白的純化。無血清培養(yǎng)基一般針對某一特定細(xì)胞類型優(yōu)化并有幾類無血清培養(yǎng)基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養(yǎng)基低得多）。無蛋白培養(yǎng)基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學(xué)成分的培養(yǎng)基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應(yīng)用的一種。在含血清時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞可以適應(yīng)無血清培養(yǎng)基，無蛋白培養(yǎng)基或限定化學(xué)成分的培養(yǎng)基。在部分情況下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），對于已適應(yīng)無血清或無蛋白培...

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：優(yōu)化細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前，先制定一個適當(dāng)?shù)姆N板方案，使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài)。增加成功幾率—細(xì)胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個關(guān)鍵元素，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量。此外，還常用促有絲分裂刺激物(如，細(xì)菌轉(zhuǎn)化，生長因子，條件培養(yǎng)基，以及滋養(yǎng)細(xì)胞)來活化原代培養(yǎng)細(xì)胞。貼壁細(xì)胞相比較懸浮細(xì)胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞之間的差異明顯。天生趨于懸浮的細(xì)胞(如HL60，Jurkat)非常難以轉(zhuǎn)染。相反，天生為貼壁的細(xì)胞(如HEK，CHO)則可適應(yīng)懸浮生長的條件。對于貼壁細(xì)胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，用胰酶處...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡介：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞狀態(tài)這點(diǎn)非常重要，不要急于求成，一定要讓細(xì)胞處于較佳的生長狀態(tài)再做。有文獻(xiàn)說傳代不要超過17代。細(xì)胞復(fù)蘇后的3代左右時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好，不要用傳了很多代的細(xì)胞去做，細(xì)胞的形態(tài)都會發(fā)生變化。大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。如果隨時(shí)間發(fā)現(xiàn)這種變化，融化一管新鮮的細(xì)胞可能會恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性。因此，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果?；蛘撸瑤追N來源于經(jīng)篩選，轉(zhuǎn)染效率較高細(xì)胞亞系的細(xì)胞系現(xiàn)...

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率：1.組織培養(yǎng)試劑優(yōu)化細(xì)胞生長條件。只使用新鮮配制的培養(yǎng)基和添加劑，并經(jīng)可能減少所用試劑的變更?；A(chǔ)培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基(如，RPMI1640和DMEM)。培養(yǎng)基的成分包括營養(yǎng)物質(zhì)(氨基酸，葡萄糖)，維生素，無機(jī)鹽，和緩沖物質(zhì)。有些成分非常不穩(wěn)定，因此如果不在使用時(shí)新鮮加入就可能會產(chǎn)生問題。務(wù)必要使培養(yǎng)基避光保存。因?yàn)橐阎幸恍┙M分和緩沖物質(zhì)，如HEPES，當(dāng)暴露于光照下就會分解產(chǎn)生細(xì)胞毒性物質(zhì)。另外，血清，添加劑，來自于培養(yǎng)箱內(nèi)的污染物、化學(xué)物質(zhì)，或/細(xì)胞的污染也都可能影響到細(xì)胞生理。2.細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前，先...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)簡介：實(shí)驗(yàn)原理外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和細(xì)菌介導(dǎo)法。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入;磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞;細(xì)菌法是利用包裝了外源基因的細(xì)菌傳染細(xì)胞的方法使得其進(jìn)入細(xì)胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實(shí)驗(yàn)條件控制較嚴(yán)、難度較大;細(xì)菌法的前期準(zhǔn)備較復(fù)雜、而且可能對于細(xì)胞有較大影響;所以現(xiàn)在對于很多普通細(xì)胞系，一般的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。珠海細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家供應(yīng)轉(zhuǎn)染效率：線型PEI(LinePEI,LPEI)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡介：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡介：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.準(zhǔn)備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時(shí)候，在開展正式實(shí)驗(yàn)前要多做預(yù)試驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量、DNA密度、細(xì)胞密度、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時(shí)間等等。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時(shí)候，如果電壓太大，往往會發(fā)生細(xì)胞大量死亡的情況。不同的細(xì)胞，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預(yù)實(shí)驗(yàn)，多摸索條件。對于大多數(shù)細(xì)胞來說，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外，就是進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。處于對數(shù)生長期的細(xì)胞的抗損傷能力是較強(qiáng)的。細(xì)胞濃度應(yīng)該處于5x106到1x107／mL之間。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應(yīng)該控制在4-6μg，如果﹥10μg，轉(zhuǎn)染效率也較大降低。電...