細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng)1、整個(gè)復(fù)蘇過(guò)程要盡量快，溶解時(shí)間太長(zhǎng)可能影響復(fù)蘇效果；2、已溶解的凍存細(xì)胞盡量短時(shí)間的在常溫存放，盡快稀釋或者離心去除DMSO；3、由于“化冰”這一步里凍存管與水溫差太大，尤其是液氮里拿出來(lái)的凍存管，放到水里可能會(huì)造成翻江倒海的既視感，所以可以用鑷子夾住凍存管往水里摁，這樣即使有炸裂的情況也會(huì)有水做緩沖；4、取凍存管時(shí)要謹(jǐn)防，尤其是夏天，盡管熱也比較好穿長(zhǎng)袖白大褂；5、離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進(jìn)行，也就是直接把凍存管離心，離心后棄去原來(lái)的凍存液，然后直接加完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接著把細(xì)胞轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿/瓶里培養(yǎng)。這種方法也許不能將DMSO去除得很干凈，但...

原代細(xì)胞直接來(lái)自于組織，因而更貼近地還原了生物系統(tǒng)的生理特性。它們?cè)谏茖W(xué)研究、ADME/毒性研究、藥物開(kāi)發(fā)以及細(xì)胞系不能復(fù)制目標(biāo)生物系統(tǒng)的多種應(yīng)用中越來(lái)越有用。我們可提供來(lái)自PromoCell（在特定地區(qū)提供）和CellApplications,Inc.（CAI）的原代細(xì)胞。我們的制造商已完善了100多種原代細(xì)胞的分離、純化、繼代培養(yǎng)和生長(zhǎng)。細(xì)胞具有純凈、低傳代數(shù)、嚴(yán)格表征和嚴(yán)格質(zhì)量控制的承諾。統(tǒng)一的培養(yǎng)基和試劑可提供比較好性能，確保了您能滿懷信心地將這些細(xì)胞及其支持性產(chǎn)品用于自身應(yīng)用。原代細(xì)胞哪個(gè)好？歡迎咨詢上海中喬新舟生物科技有限公司。浙江巨噬原代細(xì)胞中喬新舟 細(xì)胞一般儲(chǔ)存在...

貼壁型原代細(xì)胞1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，它們之間會(huì)互相影響，在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長(zhǎng)的活性物質(zhì)，使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(zhǎng)。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)低，細(xì)胞之間的促生長(zhǎng)作用很小，也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入單獨(dú)生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)大，會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。2）適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度，給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用，會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。3）盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功...

原代細(xì)胞顧名思義就是分離培養(yǎng)的離體細(xì)胞干細(xì)胞顧名思義就是具有自我更新能力和多分化潛能的細(xì)胞，不管是離體的還是在體的都可以叫干細(xì)胞當(dāng)然一些分離的原代細(xì)胞里是存在成體干細(xì)胞的，比如骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞等。但本質(zhì)上兩者之間沒(méi)有必然聯(lián)系，通常用于不同的場(chǎng)合和語(yǔ)境。原代細(xì)胞可用來(lái)轉(zhuǎn)染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞。目前，無(wú)論國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，原代細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個(gè)熱點(diǎn)難題，市場(chǎng)還缺乏真正有效的商品化的原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。原代細(xì)胞能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對(duì)一些寄生...

原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞、組織或，讓它們?cè)隗w外維持與生長(zhǎng)。原代培養(yǎng)的特點(diǎn)是細(xì)胞或組織剛離開(kāi)機(jī)體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們?cè)隗w內(nèi)的狀態(tài)，表現(xiàn)出來(lái)源組織或細(xì)胞的特性，因此用于藥物實(shí)驗(yàn)，尤其是藥物對(duì)細(xì)胞活動(dòng)、結(jié)構(gòu)、代謝、有無(wú)毒性或殺傷作用等，是極好的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。組織塊培養(yǎng)法許多實(shí)驗(yàn)室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng)，因?yàn)榉椒ê?jiǎn)單，細(xì)胞也較容易生長(zhǎng)。尤其是培養(yǎng)心肌，有時(shí)還可觀察到心肌組織塊搏動(dòng)。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長(zhǎng)出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后，即可進(jìn)行傳代。設(shè)備材料培養(yǎng)箱、冰箱、超凈工作臺(tái)／無(wú)菌間、無(wú)菌吸管、離心管、酒...

錯(cuò)誤：原代細(xì)胞可以很容易地重新凍存正確做法：通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。錯(cuò)誤：原代細(xì)胞可以無(wú)限增殖正確做法：與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時(shí)間的推移，大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞。像原代神經(jīng)元細(xì)胞，作為研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生機(jī)制、藥物療效的重要實(shí)驗(yàn)對(duì)象，不能傳代、分離純度低、培養(yǎng)條件要求高！行話就是“養(yǎng)細(xì)胞難、養(yǎng)原代細(xì)胞更難、...

常用于組織消化的酶包括胰蛋白酶粗制品、膠原酶、彈性蛋白酶、鏈霉蛋白酶、裂解酶、脫氧核糖核酸酶、透明質(zhì)酸酶。這些酶既可單獨(dú)使用，又可聯(lián)合使用。例如彈性蛋白酶與脫氧核糖核酸酶用于Ⅱ型肺泡細(xì)胞的分離，膠原酶與裂解酶聯(lián)用，膠原酶與透明質(zhì)酸酶聯(lián)用。還有其他非哺乳動(dòng)物酶類也可用于初的解離，如胰蛋白酶，一種重組的、來(lái)自玉米的胰蛋白酶；TrypLE(Invitrogen)，重組的微生物來(lái)源的胰蛋白酶以及Accutase和Accumax(InnovativeCellTechnologies)。因?yàn)榇种破烦；祀s有其他蛋白酶，所以粗制品通常比精制品更有效，而精制品更具有特異性，并且毒性小。胰蛋白酶和鏈霉...

細(xì)胞凍存：通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個(gè)增殖困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時(shí)間的推移，大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞。正常的原代細(xì)胞培養(yǎng)，在無(wú)污染的情況下，建議培養(yǎng)基中不加抗體，抗體會(huì)影響細(xì)胞的某些基因變異從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有差異，所以cellsystems的細(xì)胞在分離提取時(shí)就考慮到這點(diǎn)，他們不會(huì)采用任何抗體去分離和純化的同時(shí)，通過(guò)酶消化或者離心洗滌的方法讓細(xì)胞...

雖然各種組織培養(yǎng)要滿足不同的條件，但有許多因素是大多數(shù)原代培養(yǎng)共同需要的：（1）在取材時(shí)需去除脂肪和壞死的組織。（2）為減小對(duì)組織的損傷，需用鋒利的器具。（3）適度離心以去除用于解離的酶。（4）由于原代培養(yǎng)組織細(xì)胞的存活率很低，故用于原代培養(yǎng)的細(xì)胞的密度應(yīng)高于正常的傳代培養(yǎng)的細(xì)胞密度。（5）營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基如Ham’sF12比簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基更可取。如果可以添加血清，胎牛血清比?；蝰R的血清更好，細(xì)胞成活率更高。特殊細(xì)胞類型的分離可能需要選擇性培養(yǎng)基。（6）與成體組織相比，原代培養(yǎng)時(shí)用胚胎組織更易分離，細(xì)胞更易存活，增殖速度更快。原代細(xì)胞哪里便宜？歡迎咨詢上海中喬新舟生物科技有限公司。海南雞胚原代細(xì)...

原代細(xì)胞培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)，是從供體取得組織細(xì)胞后在體外進(jìn)行的培養(yǎng)。方法包括組織塊培養(yǎng)法，消化培養(yǎng)法，培養(yǎng)法和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法。注意事項(xiàng)：1、組織塊培養(yǎng)法：（1）剛接種后，組織塊粘附不牢固，觀察和轉(zhuǎn)移過(guò)程中動(dòng)作要輕，以防引起液體振蕩，使組織塊漂起（2）培養(yǎng)初期，要注意觀察有無(wú)細(xì)菌、霉菌污染（3）原代培養(yǎng)要及時(shí)觀察，記錄（4）過(guò)3-5天，需要換液以除去漂浮組織塊和殘留的血細(xì)胞，保證原代細(xì)胞正常生長(zhǎng)2、消化培養(yǎng)法：某些特殊類型細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞需用特殊的消化手段和步驟進(jìn)行。3、培養(yǎng)和組織塊培養(yǎng)類似；4、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法:注意調(diào)整細(xì)胞濃度。原代細(xì)胞服務(wù)哪家好？歡迎咨詢上海中喬新舟生物科技有限公司。江蘇雞胚原...

原代細(xì)胞體外培養(yǎng)現(xiàn)狀：原代細(xì)胞自然生長(zhǎng)有兩種方式，錨定依賴或非錨定依賴，這主要取決于它們?cè)隗w內(nèi)的組織來(lái)源：外周血（非錨定依賴）或固體組織部位（錨定依賴）。原代細(xì)胞一旦分離后，24-48h內(nèi)需要進(jìn)行貼壁或起始，開(kāi)始培養(yǎng)。廣義地說(shuō)，所有的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，無(wú)論其類型或來(lái)源，都需要在與人類生理?xiàng)l件非常相似的條件下生長(zhǎng)。此外，它們還需要一個(gè)pH可調(diào)節(jié)的生長(zhǎng)環(huán)境，并且培養(yǎng)基中需包含細(xì)胞類型特定的營(yíng)養(yǎng)因子、生長(zhǎng)因子、葡萄糖和/或物品。為了確定一種特定細(xì)胞類型在低至無(wú)血清培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)和功能所需的較低條件，相關(guān)研究工作已經(jīng)揭示了生長(zhǎng)培養(yǎng)基必須包含的基本成分：胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、葡萄糖和各種鹽、維生素...

原代細(xì)胞顧名思義就是分離培養(yǎng)的離體細(xì)胞干細(xì)胞顧名思義就是具有自我更新能力和多分化潛能的細(xì)胞，不管是離體的還是在體的都可以叫干細(xì)胞當(dāng)然一些分離的原代細(xì)胞里是存在成體干細(xì)胞的，比如骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞等。但本質(zhì)上兩者之間沒(méi)有必然聯(lián)系，通常用于不同的場(chǎng)合和語(yǔ)境。原代細(xì)胞可用來(lái)轉(zhuǎn)染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞。目前，無(wú)論國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，原代細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個(gè)熱點(diǎn)難題，市場(chǎng)還缺乏真正有效的商品化的原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。原代細(xì)胞能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對(duì)一些寄生...

人或動(dòng)物體內(nèi)（或胚胎）的組織，將其剪碎至1mm3的組織塊，再采用如下方法進(jìn)行原代細(xì)胞分離培養(yǎng)：一、懸浮細(xì)胞的分離方法1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。2、去掉上清，離心沉淀用無(wú)鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復(fù)兩次。3、用培養(yǎng)基重懸，調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后分瓶培養(yǎng)。4、如選用懸液中某種細(xì)胞，可采用離心后的細(xì)胞分層液收獲目的細(xì)胞。二、實(shí)體組織材料的分離方法（一）機(jī)械分散法1、纖維成分很少的腦組織，部分胚胎組織，用剪刀剪碎至1mm3的組織塊。2、用PBS清洗兩次后①用吸管吹打，分散組織細(xì)胞。②或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M...

消化培養(yǎng)法它與上述組織塊培養(yǎng)法的主要區(qū)別有2點(diǎn)。一要用酶制劑（常用的是胰蛋白酶）處理組織塊，除去細(xì)胞間質(zhì)，使細(xì)胞相互分離，形成細(xì)胞懸液；二細(xì)胞生長(zhǎng)方式多為單層(monolayer)。本方法的優(yōu)點(diǎn)在于單層細(xì)胞更易攝取營(yíng)養(yǎng)、排出代謝產(chǎn)物，因此生長(zhǎng)較快，可較快地應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究；缺點(diǎn)是步驟頗為繁瑣，操作不慎易污染。此外，消化處理要恰到好處，不然對(duì)細(xì)胞會(huì)有一定的損傷作用。需要說(shuō)明及注意的問(wèn)題（1）用何種酶進(jìn)行消化可視所培養(yǎng)細(xì)胞而定，除胰蛋白酶外，常用1型膠原酶消化睪丸支持細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞；用II型膠原酶消化大鼠腺垂體細(xì)胞等。（2）如果沒(méi)有不銹鋼篩，可用4層紗布代替，但紗布要預(yù)先...

原代細(xì)胞與細(xì)胞系該如何選？原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，一般認(rèn)為，原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в凶兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。細(xì)胞系因其容易培養(yǎng)、種類多、產(chǎn)量可觀的優(yōu)點(diǎn)一直是細(xì)胞水平研究的優(yōu)先，且價(jià)格相對(duì)低廉，但細(xì)胞系“價(jià)廉卻不一定物美”。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞系在連續(xù)...

原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細(xì)胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長(zhǎng)。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的比較大生長(zhǎng)空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。細(xì)胞系是不斷生長(zhǎng)、分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過(guò)遺傳改造，致使其具有無(wú)限增長(zhǎng)的潛能。體外生長(zhǎng)的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。但實(shí)際上，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞系隨著代數(shù)的增加，細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系...

需要說(shuō)明及注意的問(wèn)題（1）如果是用培養(yǎng)瓶而不是培養(yǎng)皿，則接種組織塊千培養(yǎng)瓶底壁后，要輕輕地翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，令瓶底在上，蓋好瓶蓋后輕輕置入37°C的CO2培養(yǎng)箱，2~4h后，取出培養(yǎng)瓶，在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，仍令組織塊在上方。在組織塊對(duì)面瓶壁加入適量上述培養(yǎng)液。然后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，讓組織塊浸沒(méi)于培養(yǎng)液中。蓋好瓶蓋后放回二氧化碳孵箱，繼續(xù)培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)皿表面游離下來(lái)的組織塊，棄去即可。（3）如果使用玻璃培養(yǎng)瓶，而不是新的塑料培養(yǎng)瓶，則比較好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾膠原，這樣不但有利于組織塊的黏附，而且可使細(xì)胞生長(zhǎng)得更好。（4）本方法適于各種組織的培養(yǎng)，操作者還可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要和細(xì)胞種類加以...

原代細(xì)胞的培養(yǎng)與建系細(xì)胞的來(lái)源多樣，培養(yǎng)方法也各不相同，凡是來(lái)源于胚胎、組織部位及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來(lái)的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進(jìn)行再次培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。若能穩(wěn)定生長(zhǎng)傳至10~20代以上的細(xì)胞可確立為細(xì)胞系。若有條件能開(kāi)展單細(xì)胞克隆、純化，經(jīng)大量擴(kuò)增后所形成的生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細(xì)胞群，稱之為細(xì)胞株或克隆細(xì)胞。此過(guò)程稱為細(xì)胞的純化或細(xì)胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ)，只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學(xué)習(xí)和掌握其他方法,本章重點(diǎn)敘述常用的基本技術(shù)?？壳肮?jié)原代細(xì)胞的取材人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的...