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什么是液相色譜？

液相色譜是一類分離與分析技術，其特點是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術發(fā)展的過程中．為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

經(jīng)典液相色譜的流動相是依靠重力緩慢地流過色譜柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分離后的樣品是被分級收集后再進行分析的，使得經(jīng)典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作也比較復雜。直到20世紀60年代．發(fā)展出粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高壓輸液泵和自動記錄的檢測器，克服了經(jīng)典液相色譜的缺點，發(fā)展成高效液相色譜，也稱為高壓液相色譜。

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高效液相色譜

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“**離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。

高效液相色譜的歷史

1903年俄國植物化學家茨維特（Tswett）***提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法 chromatography 來描述他的彩色試驗。

1930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術。

1952年，英國學者Martin和Synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作，提出了關于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術向前推進了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。

1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導致了氨基酸分析儀的出現(xiàn)，這是近代液相色譜的一個重要嘗試，但分離效率尚不理想。

1960年中后期，氣相色譜理論和實踐發(fā)展，以及機械、光學、電子等技術上的進步，液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。

1970年中期以后，微處理機技術用于液相色譜，進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。

1990年以后，生物工程和生命科學在國際和國內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類基因組計劃，蛋白質組學有HPLC作預分離等。

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高效液相色譜相關術語

色譜峰(peak)——組分流經(jīng)檢測器時響應的連續(xù)信號產(chǎn)生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對稱形正態(tài)分布曲線（高斯Gauss曲線）。不對稱色譜峰有兩種：

前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少見。

峰底—基線上峰的起點至終點的距離。

峰高(peak height，h)—峰的比較高點至峰底的距離。

峰寬（peak width，W)—峰兩側拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點間的距離。W=4σ

半峰寬（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半處的峰寬。Wh/2=2.355σ

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