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Hi-SNP結(jié)合多重PCR技術(shù)和高通量測序技術(shù),對需要檢測的位點設(shè)計特異性引物,在單管內(nèi)進行多重PCR擴增,不同的樣本以不同的Barcode引物區(qū)分?;旌蠘颖竞?,在Ion Proton/Ion Torrent平臺上,對擴增子進行高通量測序。測序結(jié)果使用生物信息學(xué)方法,區(qū)分不同的樣本,,終獲得每個位點的SNP信息。高通量測序能一次對幾百萬條DNA分子進行序列測定,相比其他的SNP檢測技術(shù),基于高通量測序的SNP分型具有更準確、更靈敏的特點。上海翼和生物提供高同源區(qū)段SNP分型服務(wù)。
傳統(tǒng)的SNP檢測方法是采用一些已有的成熟技術(shù),如DNA測序、等位基因特異的寡聚核苷酸雜交(ASO)等。浙江高同源區(qū)段SNP分型哪里做
二代測序法主要通過PCR的方法,對目標SNP位點進行特異性捕獲。為了提**型的通量,目前多采用多重PCR的方法同時對多個位點進行捕獲(可同時對1-100位點進行分型)。由于二代測序通量是足夠滿足數(shù)百數(shù)千樣本的同時測序,因此需要對不同的樣本添加***的樣本標簽(Barcode),從而在后續(xù)數(shù)據(jù)分析過程中,能夠進行樣本拆分。因此在多重PCR完成***輪多SNP位點捕獲后,需要進行第二輪PCR,在***輪PCR產(chǎn)物的基礎(chǔ)上,添加樣本樣本標簽及測序接頭等序列。通過PCR條件優(yōu)化,目前亦可實現(xiàn)一次反應(yīng),兩輪PCR接力完成的效果。浙江高同源區(qū)段SNP分型哪里做理論上講,SNP既可能是二等位多態(tài)性,也可能是3個或4個等位多態(tài)性。
SNP挑選:(1)SNP位于非編碼區(qū);(2)SNP平均分布在29條常染色體上;(3),小等位基因頻度(MAF)需大于30%,保證位點有足夠多態(tài)性;SNP鑒定方法~翼和Hi-SNP:59個SNP采用上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司的Hi-SNP技術(shù),由本公司實施多重PCR建庫與illumina X-10測序。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學(xué)會理事單位,是上海市****,至今已有十六年歷史,專注于為國內(nèi)科研工作者和生物醫(yī)藥企業(yè)提供各類分子遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)(高同源區(qū)段SNP分型)和質(zhì)控試劑盒。
TaqMan熒光探針是一種寡核苷酸探針,熒光基團連接在探針的5’末端,而淬滅劑則在3’末端。在PCR反應(yīng)體系中加入2種不同熒光標記的探針,它們可以分別與2個等位基因完全配對。正常情況下,由于探針5’端熒光基團和3’端淬滅基團緊鄰在一起,熒光被淬滅。隨著PCR有效的進行,與模板完全配對的探針逐步被TaqDNA聚合酶5’——3’外切酶活性切割,致使探針5’端熒光基團和3’端淬滅基團分離,淬滅效應(yīng)解除,報告熒光基團被***,檢測到熒光信號,相反,如果模板不能完全配對的探針(**另一種等位基因)不能被有效切割,因此檢測不到熒光信號,從而實現(xiàn)SNP位點的分型檢測。高同源區(qū)段是二倍體和多倍體都存在的,由于多倍體來自染色體加倍,高同源區(qū)段在多倍體中更是普遍現(xiàn)象。
理論上講,SNP既可能是二等位多態(tài)性,也可能是3個或4個等位多態(tài)性,但實際上,后兩者非常少見,幾乎可以忽略。因此,通常所說的SNP都是二等位多態(tài)性的。這種變異可能是轉(zhuǎn)換(C T,在其互補鏈上則為G A),也可能是顛換(C A,G T,C G,A T)。轉(zhuǎn)換的發(fā)生率總是明顯高于其它幾種變異,具有轉(zhuǎn)換型變異的SNP約占2/3,其它幾種變異的發(fā)生幾率相似。Wang等的研究也證明了這一點。轉(zhuǎn)換的幾率之所以高,可能是因為CpG二核苷酸上的胞嘧啶殘基是人類基因組中,易發(fā)生突變的位點,其中大多數(shù)是甲基化的,可自發(fā)地脫去氨基而形成胸腺嘧啶。在基因組DNA中,任何堿基均有可能發(fā)生變異,因此SNP既有可能在基因序列內(nèi),也有可能在基因以外的非編碼序列上??偟膩碚f,位于編碼區(qū)內(nèi)的SNP(coding SNP,cSNP)比較少,因為在外顯子內(nèi),其變異率*及周圍序列的1/5.但它在遺傳性疾病研究中卻具有重要意義,因此cSNP的研究更受關(guān)注。如何在HSVs和PSVs篩選到等為同源序列變異SNPs,是高同源區(qū)段SNP及序列分析所面臨的挑戰(zhàn)。北京分型哪里好
SNP是人類可遺傳的變異中比較常見的一種。占所有已知多態(tài)性的90%以上。浙江高同源區(qū)段SNP分型哪里做
上海翼和多倍體擴增子測序SNP分型,結(jié)合多重PCR技術(shù)和高通量測序技術(shù),對需要檢測的位點設(shè)計特異性引物,在單管內(nèi)進行多重PCR擴增,不同的樣本以不同的Barcode引物區(qū)分,對擴增子進行高通量測序。測序結(jié)果使用生物信息學(xué)方法,區(qū)分不同的樣本。并且將多倍體的不同基因組進行拆分后,對測序短序列進行精細reads mapping,剔除HSV和PSV干擾,**終獲得每個位點準確的分型信息。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學(xué)會理事單位,是上海市****。浙江高同源區(qū)段SNP分型哪里做
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是一家第三方檢測服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評估;大健康檢測;遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細胞點突變檢測;細胞端粒長度和端粒酶活性檢測。的公司,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實、誠實可信的企業(yè)。翼和生物深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)?,為客戶提?**的細胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測,生物技術(shù)服務(wù)。翼和生物繼續(xù)堅定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,既要實現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長,又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,實現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。翼和生物始終關(guān)注自身,在風(fēng)云變化的時代,對自身的建設(shè)毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使翼和生物在行業(yè)的從容而自信。