數(shù)字PCR是一種核酸分子***定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法,光度法基于核酸分子的吸光度來定量;,Ct值就是指可以檢測到熒光值對應(yīng)的循環(huán)數(shù);數(shù)字PCR是***的定量技術(shù),基于單分子PCR方法來進(jìn)行計數(shù)的核酸定量,是一種***定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。能檢測低至0.01%的突變基因。上海流式數(shù)字PCR解決方案
**個體化診療
通過檢測T790M位點突變情況,可以更好地評估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了****的檢測精度,此外,dPCR***定量的優(yōu)勢也能充分發(fā)揮出來了,可以監(jiān)控突變含量變化,做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。
2.)基因表達(dá)分析
伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細(xì)胞白血病(CML)患者延長生存期,但是臨床上發(fā)現(xiàn),伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達(dá)量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行測定,結(jié)果檢測下限可以達(dá)到0.001%,顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優(yōu)勢 南通微滴式數(shù)字PCR報價液體活檢:早篩、用藥、監(jiān)測、復(fù)發(fā)。
研究方向
*****的實時監(jiān)控
已有數(shù)篇文章報道了使用數(shù)字PCR技術(shù)對患者***過程中的循環(huán)**DNA(ctDNA)進(jìn)行檢測,實時監(jiān)控疾病進(jìn)展。在非小細(xì)胞肺*、乳腺*和腸*等多種**患者中都取得了令人鼓舞的結(jié)果。與影像學(xué)及其他常規(guī)指標(biāo)相比,ctDNA突變及豐度改變通常會提前數(shù)月出現(xiàn),這樣就可以提醒醫(yī)生及時調(diào)整***方案,使患者得到更有效的***。
隨著數(shù)字PCR熒光通道的增加和多指標(biāo)檢測的成熟,數(shù)字PCR將會進(jìn)入更多應(yīng)用領(lǐng)域,有力推動生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、檢驗檢疫、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的快速發(fā)展。
相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:
· 能夠有效區(qū)分濃度差異微小的樣品:更好的準(zhǔn)確度、精密度和重復(fù)性,可以用于精確測定靶基因的相對表達(dá),基因拷貝數(shù)變異分析等。
· 數(shù)字PCR可開發(fā)針對不同**、不同樣本以及不同的樣本環(huán)境提供檢測解決方案,該技術(shù)的應(yīng)用范圍廣,尤其在液體活檢領(lǐng)域,已開發(fā)針對肺*、乳腺*、腸*、胃*等上百個位點檢測試劑盒,可精細(xì)指導(dǎo)臨床***的診斷,以便患者在后續(xù)得到更及時并且適當(dāng)?shù)?**方案提供。 分辨率——低至0.1倍基因表達(dá)差異。
研究方向
無創(chuàng)產(chǎn)前篩查
無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷, 如21號染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關(guān)遺傳疾病)。目前標(biāo)本來源主要為血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準(zhǔn)確性。而QX200檢測系統(tǒng)獨特的微滴化技術(shù)完全可以作為二代測序法的補充來進(jìn)行的無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷,從而提高工作效率及節(jié)約成本。
轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測
目前在確定轉(zhuǎn)基因作物或成分的含量時采取定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線法,這種方法需要依賴于已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(Certified Reference Materials Calibrants, CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定標(biāo)工作。 數(shù)字PCR儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域。常州國產(chǎn)數(shù)字PCR代理商
采用微滴式技術(shù)高達(dá)100,000個的微滴。上海流式數(shù)字PCR解決方案
與常規(guī)PCR方法相比,數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢:
1、能夠完全定量:常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA曲線,但是由于待檢樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線不在統(tǒng)一體系,條件上會存在差異,另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而數(shù)字PCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴增動力學(xué)影響,可進(jìn)行完全定量。
2、樣本需求量低:適用于珍貴樣本或核酸降解嚴(yán)重的樣本
3、靈敏度高:數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個**PCR反應(yīng),這些反應(yīng)可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。
4、高耐受性:由于目的序列被分配到多個**反應(yīng)體系中,明顯降低了背景信號和yì zhì物對反應(yīng)的干擾,擴增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。
上海流式數(shù)字PCR解決方案
浚和(上海)儀器有限公司是一家供應(yīng)國內(nèi)外先進(jìn)儀器和設(shè)備的專業(yè)供應(yīng)商和服務(wù)商,致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來,持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業(yè)提供先進(jìn)的產(chǎn)品和專業(yè)的服務(wù)。
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