青海實(shí)驗(yàn)室數(shù)字PCR安裝

基因檢測(cè)**前沿的兩種方法是：高通量測(cè)序（NGS）和數(shù)字PCR(dPCR)。高通量測(cè)序技術(shù)又稱“下一代”測(cè)序技術(shù)，可以一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定，功能強(qiáng)大，但是實(shí)驗(yàn)操作較復(fù)雜，數(shù)據(jù)分析難度較大，檢測(cè)周期長(zhǎng)，成本較高。數(shù)字PCR技術(shù)是目前**精細(xì)**靈敏的基因檢測(cè)技術(shù)，借助微液滴或微腔室，通過(guò)單個(gè)模板分子的PCR擴(kuò)增，可實(shí)現(xiàn)不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線和參照樣本的***定量。與NGS相比，數(shù)字PCR靈敏度高、檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果易讀、成本低廉等優(yōu)勢(shì)使其更適合臨床檢測(cè)，成為精細(xì)醫(yī)療實(shí)現(xiàn)平民化、大眾化的比較好選擇。此外，數(shù)字PCR還在基因表達(dá)差異研究、拷貝數(shù)變異(CNV)研究、低豐度DNA模板分子的精確定量、甲基化含量鑒定、二代測(cè)序輔助建庫(kù)、CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證、轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)、移植排異監(jiān)控、腸道菌群分析以及***基因組檢測(cè)等眾多領(lǐng)域中有著優(yōu)異的應(yīng)用。支持多重?cái)?shù)字PCR，可選全中文分析軟件。青海實(shí)驗(yàn)室數(shù)字PCR安裝

與常規(guī)PCR方法相比，數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢(shì)：1、能夠***定量：常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA曲線，但是由于待檢樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線不在統(tǒng)一體系，條件上會(huì)存在差異，另外加上PCR擴(kuò)增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而數(shù)字PCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響，可進(jìn)行***定量。2、樣本需求量低：適用于珍貴樣本或核酸降解嚴(yán)重的樣本。3、靈敏度高：數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬(wàn)個(gè) PCR反應(yīng)，這些反應(yīng)可以精確地檢測(cè)很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。4、高耐受性：由于目的序列被分配到多個(gè) 反應(yīng)體系中，***降低了背景信號(hào)和***物對(duì)反應(yīng)的干擾，擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。廣東噪音小數(shù)字PCR咨詢報(bào)價(jià)油包水乳化微滴技術(shù)，在微管道中利用氣壓驅(qū)動(dòng)生成十萬(wàn)個(gè)微滴，單個(gè)微滴體積體積低至皮升級(jí)。

數(shù)字PCR也叫DigitalPCR（dPCR），是近幾年發(fā)展起來(lái)的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來(lái)說(shuō)，數(shù)字PCR對(duì)結(jié)果的判定不依賴于擴(kuò)增曲線循環(huán)Ct值，不受擴(kuò)增效率的影響，能夠直接讀出DNA的分子個(gè)數(shù)，能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。數(shù)字PCR基本原理是將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬(wàn)份，然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中，使每個(gè)微滴單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸分子（即DNA模板），每個(gè)單元都會(huì)對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增，然后再對(duì)每個(gè)單元進(jìn)行熒光信號(hào)的統(tǒng)計(jì)并計(jì)算。相對(duì)而言，傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中，這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。   

二代測(cè)序輔助建庫(kù)目前靶向測(cè)序建庫(kù)方法包括擴(kuò)增子方法，在均相溶液中，當(dāng)擴(kuò)增引物增加時(shí)，由于擴(kuò)增引物之間的相互作用，從而影響擴(kuò)增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴(kuò)增，將可降低引物間相互作用，提高擴(kuò)增效率。同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)于少量模板的有效擴(kuò)增，得到更多的有效測(cè)序數(shù)據(jù)。CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明，是基因編輯技術(shù)的一大突破，但如何驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否成功，仍需要高靈敏度的檢測(cè)方法，數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團(tuán)隊(duì)發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對(duì)核酸進(jìn)行高靈敏度的定性檢測(cè)，但精確定量評(píng)估時(shí)仍采取了數(shù)字PCR進(jìn)行確認(rèn)。線性范圍達(dá)到6個(gè)數(shù)量級(jí)，靈敏度低至萬(wàn)分之一。

相對(duì)于二代測(cè)序、基因芯片和定量PCR而言，數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢(shì):●靈敏度可達(dá)到單個(gè)核酸分子：檢測(cè)限低至0.001%，主要系為數(shù)字PCR可以實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)DNA/RNA的生物濃縮；●無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線活參照基因進(jìn)行對(duì)比來(lái)測(cè)定核算量，可對(duì)靶分子起始量進(jìn)行***定量，直接獨(dú)處DNA分子 的個(gè)數(shù)；●適合環(huán)境復(fù)雜樣品的檢測(cè)：終點(diǎn)PCR檢測(cè)，不依賴Ct值，不依賴擴(kuò)增效率，能克服PCR 劑的影響，避免樣品間的交叉 問(wèn)題，適合各類復(fù)雜環(huán)境中的樣本進(jìn)行 定量，如動(dòng)血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等；雙通道熒光檢測(cè)，支持EvaGreen染料及探針法。青海實(shí)驗(yàn)室數(shù)字PCR安裝

采用微滴式技術(shù)高達(dá)100,000個(gè)的微滴。青海實(shí)驗(yàn)室數(shù)字PCR安裝

數(shù)字PCR(dPCR)是近年來(lái)引起重視并迅速發(fā)展起來(lái)的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進(jìn)行稀釋,分配到大量 的反應(yīng)單元中,使每個(gè)反應(yīng)單元中只有單個(gè)模板分子,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)每個(gè)反應(yīng)室的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,來(lái)定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴(kuò)增后定量,因此不依賴擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無(wú)需采用內(nèi)參基因和標(biāo)準(zhǔn)曲線,準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好,可以實(shí)現(xiàn)***定量分析。由于其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì),已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、環(huán)境微生物檢測(cè)和下一代測(cè)序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用前景。青海實(shí)驗(yàn)室數(shù)字PCR安裝

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