南京微流控芯片數(shù)字PCR如何選型

精細(xì)診斷是精細(xì)醫(yī)學(xué)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，液體活檢作為一種無(wú)創(chuàng)、均一的檢測(cè)技術(shù)，迅速成為精細(xì)診斷領(lǐng)域的新星，2015年被《麻省理工大學(xué)科技評(píng)論》評(píng)選為年度 突破技術(shù)，2017年入選世界經(jīng)濟(jì)論壇評(píng)出的全球 新興技術(shù)，引發(fā)了全球科研、臨床和產(chǎn)業(yè)界的極大熱情，已在**、產(chǎn)前診斷、***移植等疾病領(lǐng)域***被應(yīng)用。數(shù)字PCR技術(shù)與高通量的二代測(cè)序技術(shù)，共同組成液體活檢領(lǐng)域的兩大利器；數(shù)字PCR技術(shù)是公認(rèn)的液體活檢領(lǐng)域靈敏度比較高的檢測(cè)方法，采用有限稀釋的方法將目標(biāo)分子分割到 的反應(yīng)體系中，在不依賴(lài)標(biāo)準(zhǔn)曲線條件下實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)***定量檢測(cè)，能檢測(cè)低至0.01%的突變基因；Bio-Rad及ThermoFisher目前是這一領(lǐng)域的主導(dǎo)者，分別采用微滴或芯片方式將樣本分割成兩萬(wàn)份，MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動(dòng)的方法將樣本分割成50萬(wàn)份，打破了國(guó)外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。檢測(cè)數(shù)量一次可達(dá)96個(gè)樣品。南京微流控芯片數(shù)字PCR如何選型

數(shù)字PCR檢測(cè)及分析原理在上世紀(jì)90年代就被提出來(lái)了，但是無(wú)奈受限于當(dāng)時(shí)的技術(shù)條件，樣本稀釋及分配都是靠手工來(lái)完成的，受到很多因素的干擾和限制；并且結(jié)果分析對(duì)于研究者來(lái)說(shuō)也十分枯燥與繁瑣，因此在很長(zhǎng)一段時(shí)間dPCR發(fā)展停滯不前。后來(lái)由于微流控技術(shù)與微納集成制造工藝的發(fā)展解決了dPCR過(guò)程中的幾個(gè)關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題，推動(dòng)了dPCR的研究與商業(yè)化的發(fā)展。目前根據(jù)dPCR樣本稀釋分配的方式，基本可分為三大類(lèi)，一種是基于大規(guī)模集成微流控芯片；第二種是使用微反應(yīng)室/孔板；第三種是微滴式。但不論是走芯片式還是微滴式，其基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或者微滴當(dāng)中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于1或者等于1。經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增之后，有一個(gè)核酸分子的模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒(méi)有模板的反應(yīng)器沒(méi)有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，可以推算出原始溶液的核酸濃度。無(wú)錫永諾數(shù)字PCR銷(xiāo)售電話FAM、VIC雙通道熒光檢測(cè)。

MicroDrop-100數(shù)字PCR系統(tǒng)具有如下優(yōu)點(diǎn)：1、JUE對(duì)定量，結(jié)果判讀不需要依賴(lài)標(biāo)準(zhǔn)曲線；2、突破局限，檢測(cè)靈敏度可低至萬(wàn)分之一；3、專(zhuān)利設(shè)計(jì)的具有高精度復(fù)雜三維微納防污染結(jié)構(gòu)的微流控芯片，單張可同時(shí)處理1-8個(gè)樣本；4、一鍵式自動(dòng)操作，20uLPCR體系可生成100,000微滴，8個(gè)樣本單次微滴生成 需2分鐘；5、FAM、HEX（VIC）雙熒光通道，半導(dǎo)體激光器做為激發(fā)光源相比LED光源，穩(wěn)定性高，功率穩(wěn)定不影響檢測(cè)靈敏度，單色性能優(yōu)異降低對(duì)檢測(cè)特異性的影響，且方向性好；6、檢測(cè)器為2個(gè)光電倍增管，靈敏度及增益優(yōu)于MPCC或CCD,普通的硅光子計(jì)數(shù)器，增益為10^5，光電倍增管增益可以達(dá) 到10^9；7、 知識(shí)產(chǎn)權(quán)的軟件系統(tǒng)可直接計(jì)算拷貝數(shù)、拷貝數(shù)濃度，CNV值，突變豐度；閾值線可自動(dòng)或手動(dòng)完成，每個(gè)樣本可單獨(dú)設(shè)定閾值線；輸出數(shù)據(jù)圖標(biāo)、直方圖、一維圖、二維圖、濃度圖、95%置信度不確定性區(qū)間等；軟件可自動(dòng)識(shí)別復(fù)雜微滴分簇四簇；軟件具備數(shù)據(jù)質(zhì)控功能，支持陽(yáng)性微滴數(shù)、陰性微滴數(shù)、總微滴數(shù)統(tǒng)計(jì)及這些指標(biāo)的任意組合；單個(gè)樣本100,000微滴的反應(yīng)體系以及高靈敏度的檢測(cè)系統(tǒng)，配以獨(dú)特的軟件系統(tǒng)，可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)20重的PCR分析；8、單次檢測(cè)通量96個(gè)樣本，操作靈活；

二代測(cè)序輔助建庫(kù)目前靶向測(cè)序建庫(kù)方法包括擴(kuò)增子方法，在均相溶液中，當(dāng)擴(kuò)增引物增加時(shí)，由于擴(kuò)增引物之間的相互作用，從而影響擴(kuò)增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴(kuò)增，將可降低引物間相互作用，提高擴(kuò)增效率。同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)于少量模板的有效擴(kuò)增，得到更多的有效測(cè)序數(shù)據(jù)。CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明，是基因編輯技術(shù)的一大突破，但如何驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否成功，仍需要高靈敏度的檢測(cè)方法，數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團(tuán)隊(duì)發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對(duì)核酸進(jìn)行高靈敏度的定性檢測(cè)，但精確定量評(píng)估時(shí)仍采取了數(shù)字PCR進(jìn)行確認(rèn)。液體活檢：早篩、用藥、監(jiān)測(cè)、復(fù)發(fā)。

數(shù)字PCR的應(yīng)用檢驗(yàn)檢疫食品安全?轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)（國(guó)標(biāo)）?病原菌鑒定?動(dòng)物源性檢測(cè)分析科研?基因表達(dá)差異監(jiān)測(cè)?CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證?甲基化含量鑒定?單細(xì)胞研究：測(cè)序、PCR臨床?**液體活檢：早篩、用藥、監(jiān)測(cè)、復(fù)發(fā)?無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查：低成本、快速?***性疾?。篐BV、HIV定量據(jù)悉，MiniDrop?**團(tuán)隊(duì)由微流控、光學(xué)、機(jī)電學(xué)、化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科交叉領(lǐng)域的**組成，依托精密儀器研發(fā)、生物納米材料與分子生物學(xué)等平臺(tái)，以微滴式數(shù)字PCR儀為**，打造了全自動(dòng)液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品，致力于解決**、***領(lǐng)域的精細(xì)診斷。適用復(fù)雜樣品的檢測(cè)。南京微滴式數(shù)字PCR品牌

準(zhǔn)確度不完全依賴(lài)于擴(kuò)增效率。南京微流控芯片數(shù)字PCR如何選型

與常規(guī)PCR方法相比，數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢(shì)：1、能夠完全定量：常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA曲線，但是由于待檢樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線不在統(tǒng)一體系，條件上會(huì)存在差異，另外加上PCR擴(kuò)增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而數(shù)字PCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響，可進(jìn)行完全定量。2、樣本需求量低：適用于珍貴樣本或核酸降解嚴(yán)重的樣本3、靈敏度高：數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬(wàn)個(gè) PCR反應(yīng)，這些反應(yīng)可以精確地檢測(cè)很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。4、高耐受性：由于目的序列被分配到多個(gè) 反應(yīng)體系中，明顯降低了背景信號(hào)和yìzhì物對(duì)反應(yīng)的干擾，擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。南京微流控芯片數(shù)字PCR如何選型

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