杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR原理

與常規(guī)的PCR的方法相比，dPCR有很好的優(yōu)勢(shì)。

***定量

常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測(cè)都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，由于樣品測(cè)定在各種條件上不會(huì)完全一致，會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異，從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響，可以進(jìn)行***定量。

樣品需求量低

在檢測(cè)珍貴樣品和樣品核酸存在降解時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì)。

高靈敏度

ddPCR本質(zhì)上是將一個(gè)傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬個(gè)**的PCR反應(yīng)，在這些反應(yīng)中可以精確地檢測(cè)到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多個(gè)微滴中，***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對(duì)反應(yīng)的干擾，擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。 分辨率——低至0.1倍基因表達(dá)差異。杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR原理

       目前數(shù)字PCR技術(shù)在臨床領(lǐng)域已經(jīng)有著非常***且***地應(yīng)用，例如在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用：HBV檢測(cè)、HIV檢測(cè)、甲型流感病毒檢測(cè)等；在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用：13/18/21號(hào)染色體三倍體檢測(cè)、遺傳性耳聾檢測(cè)、地中海貧血檢測(cè)及優(yōu)生五項(xiàng)的病毒檢測(cè)等；在**靶向***相關(guān)基因檢測(cè)中的應(yīng)用：肺*EGFR基因突變、ALK基因融合檢測(cè)、結(jié)直腸*KRAS、BRAF基因突變檢測(cè)、乳腺*HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤IDH基因突變檢測(cè)等。以**靶向***相關(guān)基因檢測(cè)為例，在**形成的超早期,會(huì)出現(xiàn)**細(xì)胞的壞死和凋亡,這些凋亡或壞死的**細(xì)胞會(huì)釋放其DNA進(jìn)入外周血,因此通過分析循環(huán)血液中是否含有**特異的游離DNA就可以達(dá)到**早期篩查的目的。然而此時(shí)DNA含量極低,對(duì)檢測(cè)的靈敏度和精確性要求極高，目前只有數(shù)字PCR技術(shù)可以檢測(cè)出來。另外進(jìn)行個(gè)體化***時(shí),需要對(duì)基因組樣本進(jìn)行分析,此時(shí)利用數(shù)字PCR技術(shù)也能**提高結(jié)果的可信性,進(jìn)而建立合理***方案。南京廣州永諾數(shù)字PCR品牌不依賴Ct值，無需標(biāo)準(zhǔn)曲線。

二代測(cè)序輔助建庫(kù)

       目前靶向測(cè)序建庫(kù)方法包括擴(kuò)增子方法，在均相溶液中，當(dāng)擴(kuò)增引物增加時(shí)，由于擴(kuò)增引物之間的相互作用，從而影響擴(kuò)增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴(kuò)增，將可降低引物間相互作用，提高擴(kuò)增效率。同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)于少量模板的有效擴(kuò)增，得到更多的有效測(cè)序數(shù)據(jù)。

CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證

       CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明，是基因編輯技術(shù)的一大突破，但如何驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否成功，仍需要高靈敏度的檢測(cè)方法，數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團(tuán)隊(duì)發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對(duì)核酸進(jìn)行高靈敏度的定性檢測(cè)，但精確定量評(píng)估時(shí)仍采取了數(shù)字PCR進(jìn)行確認(rèn)。

MicroDrop-100系統(tǒng)產(chǎn)品特點(diǎn)：

一、適應(yīng)性廣，靈活性高

1、理論上可覆蓋qPCR（熒光定量PCR)的所有應(yīng)用

2、樣本多樣性，樣本通量可達(dá)96個(gè)樣本，支持靈活設(shè)定

3、開放式平臺(tái)，支持用戶自行開發(fā)試劑、產(chǎn)品。

二、靈敏度高，準(zhǔn)確性高

1、***定量——無需依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線

2、采用微滴式技術(shù)高達(dá)100,000個(gè)的微滴

3、線性范圍達(dá)到6個(gè)數(shù)量級(jí)，靈敏度高達(dá)萬分之一

三、可分析復(fù)雜混合物

1、準(zhǔn)確度不完全依賴于擴(kuò)增效率

2、雙通道熒光檢測(cè)，支持EvaGreen染料及探針法

3、支持多重?cái)?shù)字PCR

四、操作簡(jiǎn)單，使用方便

1、全封閉防污染設(shè)計(jì)，一鍵式自動(dòng)化操作。

2、可選全中文分析軟件 樣本多樣性，樣本通量可達(dá)96個(gè)樣本，支持靈活設(shè)定。

       數(shù)字PCR是一種核酸分子***定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；，Ct值就是指可以檢測(cè)到熒光值對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是***的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種***定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。永諾生物MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR儀超越行業(yè)的10萬個(gè)微滴數(shù)，保證泊松分布所需要的充分的樣本量。JUE對(duì)定量數(shù)字PCR正規(guī)代理

率先行業(yè)的10萬個(gè)微滴數(shù)，保證泊松分布所需要的充分的樣本量。杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR原理

       微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增前對(duì)樣品進(jìn)行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個(gè)納升級(jí)的微滴，其中每個(gè)微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個(gè)至數(shù)個(gè)待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴(kuò)增后，逐個(gè)對(duì)每個(gè)微滴進(jìn)行檢測(cè)，有熒光信號(hào)的微滴判讀為1，沒有熒光信號(hào)的微滴判讀為0，根據(jù)泊松分布原理及陽(yáng)性微滴的個(gè)數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。

與傳統(tǒng)PCR相比所具有的優(yōu)勢(shì)

       不依賴Ct值或內(nèi)參基因，即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數(shù)目。微滴技術(shù)讓數(shù)字PCR更低成本，且更實(shí)用。

杭州國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR原理

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