在定量PCR時,我們常常糾結一個問題,究竟是相對定量還是***定量呢?如今,你無需糾結了,因為數(shù)字PCR(digital PCR)來了。盡管這兩種技術有些類似,都是估計起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量,而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域:拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達研究(如等位基因不平衡表達)、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。MicroDrop?數(shù)字PCR可廣泛應用于科研、醫(yī)療、出入境檢驗檢疫等領域。廣州流式數(shù)字PCR如何選型
目前數(shù)字PCR技術在臨床領域已經(jīng)有著非常***且***地應用,例如在病原微生物檢測中的應用:HBV檢測、HIV檢測、甲型流感病毒檢測等;在產(chǎn)前診斷中的應用:13/18/21號染色體三倍體檢測、遺傳性耳聾檢測、地中海貧血檢測及優(yōu)生五項的病毒檢測等;在**靶向***相關基因檢測中的應用:肺*EGFR基因突變、ALK基因融合檢測、結直腸*KRAS、BRAF基因突變檢測、乳腺*HER2基因擴增檢測、神經(jīng)膠質瘤IDH基因突變檢測等。以**靶向***相關基因檢測為例,在**形成的超早期,會出現(xiàn)**細胞的壞死和凋亡,這些凋亡或壞死的**細胞會釋放其DNA進入外周血,因此通過分析循環(huán)血液中是否含有**特異的游離DNA就可以達到**早期篩查的目的。然而此時DNA含量極低,對檢測的靈敏度和精確性要求極高,目前只有數(shù)字PCR技術可以檢測出來。另外進行個體化***時,需要對基因組樣本進行分析,此時利用數(shù)字PCR技術也能**提高結果的可信性,進而建立合理***方案。寧波流式數(shù)字PCR如何選型液體活檢:早篩、用藥、監(jiān)測、復發(fā)。
數(shù)字PCR(Digital PCR-dPCR)技術是一種新的核酸檢測和定量方法,與傳統(tǒng)定量PCR(qPCR)技術不同,數(shù)字PCR采用***定量的方式,不依賴于標準曲線和參照樣本,直接檢測目標序列的拷貝數(shù)。由于這種檢測方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性,dPCR迅速得到***的應用,這項技術在極微量核酸樣本檢測、復雜背景下稀有突變檢測和表達量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認可,而其在基因表達研究、microRNA研究、基因組拷貝數(shù)鑒定、**標志物稀有突變檢測、致病微生物鑒定、轉基因成分鑒定、NGS測序文庫精確定量和結果驗證等諸多方面具有的廣闊應用前景已經(jīng)受到越來越多的關注。
與常規(guī)PCR方法相比,數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢:
1、能夠完全定量:常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標準DNA曲線,但是由于待檢樣本與標準曲線不在統(tǒng)一體系,條件上會存在差異,另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結果的準確性。而數(shù)字PCR不受標準曲線和擴增動力學影響,可進行完全定量。
2、樣本需求量低:適用于珍貴樣本或核酸降解嚴重的樣本
3、靈敏度高:數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應體系分割成數(shù)萬個**PCR反應,這些反應可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質雙鏈的形成。
4、高耐受性:由于目的序列被分配到多個**反應體系中,明顯降低了背景信號和yì zhì物對反應的干擾,擴增基質效應大大減小。
準確的定量結果和優(yōu)異的重復性。
儀器特點:
MicroDrop-100A樣本制備儀
1、單張芯片一次可處理8個樣本;
2、20微升體系生成100,000微滴;
3、單次微滴生成*需2分鐘;
4、一鍵式自動化操作。儀器參數(shù)樣本體積20μl容量1~8個樣本微滴總數(shù)100,000反應時間2分鐘/芯片儀器尺寸(寬x深x高)300*400*145mm
MD Detector 微滴檢測儀
1、全封閉體系,自動化流程操作;
2、FAM、VIC雙通道熒光檢測;
3、檢測靈敏度高達萬分之一;
4、通量達96個樣品。儀器參數(shù)線性范圍6個數(shù)量級通量1~96個樣本檢測通道FAM 、HEX (VIC)儀器尺寸(寬x深x高) 700*500*325mm 能檢測低至0.01%的突變基因。上海數(shù)字PCR代理商
CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證。廣州流式數(shù)字PCR如何選型
MicroDrop-100系統(tǒng)產(chǎn)品特點
一、適應性廣,靈活性高
1、理論上可覆蓋qPCR(熒光定量PCR)的所有應用
2、樣本多樣性,樣本通量可達96個樣本,支持靈活設定
3、開放式平臺,支持用戶自行開發(fā)試劑、產(chǎn)品。
二、靈敏度高,準確性高
1、***定量——無需依賴標準曲線
2、采用微滴式技術高達100,000個的微滴
3、線性范圍達到6個數(shù)量級,靈敏度高達萬分之一
三、可分析復雜混合物
1、準確度不完全依賴于擴增效率
2、雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法
3、支持多重數(shù)字PCR
四、操作簡單,使用方便
1、全封閉防污染設計,一鍵式自動化操作。
2、可選全中文分析軟件 廣州流式數(shù)字PCR如何選型
浚和(上海)儀器有限公司是一家供應國內外先進儀器和設備的專業(yè)供應商和服務商,致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來,持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業(yè)提供先進的產(chǎn)品和專業(yè)的服務。
浚和在不斷引進國內外先進儀器設備的同時,結合行業(yè)和市場需求,加強和客戶之間的溝通,并與國際上多家**儀器設備制造商保持著長期穩(wěn)定的合作關系,不定期地與合作商進行技術交流,努力加強自身技術力量。公司配備了數(shù)名有著多年行業(yè)經(jīng)驗的技術人員,依靠雄厚的技術實力、科學合理的配置方案、專業(yè)的安裝調試和周到的售后服務,得到了廣大用戶的支持與信賴。
公司主要經(jīng)營產(chǎn)品包括:等離子清洗機、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時,公司還提供專業(yè)的技術服務,如設備的維護、驗證等。
浚和儀器將始終以行業(yè)特點為立足點,以客戶需求為導向,不斷地提高自身專業(yè)技術能力,不停地完善客戶服務質量,在發(fā)展中保持創(chuàng)新的精神,力求與客戶共同進步,為行業(yè)的發(fā)展作出不懈的努力。