廣州外泌體miRNA測(cè)序

血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導(dǎo)致的。–80°C保存被公認(rèn)是保存各種生物標(biāo)本如尿、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導(dǎo)致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過(guò)程造成的囊泡破壞。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運(yùn)輸過(guò)程中有時(shí)很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過(guò)程中使用海藻糖作為保護(hù)劑,海藻糖可以提供生物保護(hù)作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過(guò)程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過(guò)程中細(xì)胞外囊泡的損失等。外泌體可以作為藥物治理的遞送系統(tǒng)。廣州外泌體miRNA測(cè)序

所有培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng)，無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。研究發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì)，不只是mRNA，exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性，在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平。湖南干細(xì)胞外泌體利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運(yùn)輸?shù)侥繕?biāo)細(xì)胞中。

外泌體（Exosome），是細(xì)胞外囊泡（EV）的一種主要類(lèi)型，是直徑為30至150nm的納米大小的膜結(jié)構(gòu)，大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)分泌外泌體。外泌體存在于各種生物體液中，通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和代謝物等來(lái)發(fā)揮細(xì)胞間通訊功能，參與免疫應(yīng)答、代謝和心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病以及病癥進(jìn)展等多種生理和病理過(guò)程。在內(nèi)體轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒於嗄遗輧?nèi)體（MVE）的過(guò)程中，內(nèi)體膜向腔內(nèi)出芽形成腔內(nèi)囊泡（ILV），MVE與細(xì)胞膜融合釋放ILV到細(xì)胞外，即形成外泌體。

除運(yùn)輸藥物進(jìn)行疾病zhiliao之外，外泌體還能進(jìn)行免疫zhiliao，外泌體免疫zhiliao和載藥zhiliao。進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)時(shí)，外泌體通常運(yùn)載TGF-β1、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)或MAGE抗原等物質(zhì)。在這些研究中，分泌外泌體的母代細(xì)胞往往選用具有很好抗原遞呈(antigenpresentation)能力的樹(shù)突細(xì)胞或者中流細(xì)胞。Cao等采用鼠B淋巴瘤細(xì)胞作為母代細(xì)胞，通過(guò)熱處理的方式使淋巴瘤細(xì)胞分泌的外泌體含有更多的熱休克蛋白(HSP60和HSP90)和其他一些刺激免疫的分子，如主要組織相容性復(fù)合物(MHC-I和MHC[1]II)以及CD40、CD86等，與未熱處理的鼠B淋巴瘤細(xì)胞分泌的外泌體相比，熱處理后分泌的外泌體可以增強(qiáng)對(duì)T細(xì)胞的激huo能力，從而增強(qiáng)這種基于外泌體的疫苗的抗中流能力。不同類(lèi)別的外泌體囊泡有三個(gè)征：表面具涂層的膜泡、內(nèi)含纖維的膜泡、電子致密囊泡。

在運(yùn)輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹(shù)突細(xì)胞作為母代細(xì)胞，通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結(jié)合，使外泌體對(duì)DOX的運(yùn)輸具有靶向性。將對(duì)iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標(biāo)記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細(xì)胞的小鼠體內(nèi)，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達(dá)中流組織處，說(shuō)明對(duì)iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。外泌體的檢測(cè)和提取還遇到一個(gè)困難即：對(duì)各種外泌體的分類(lèi)。湖南干細(xì)胞外泌體

從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體，在活內(nèi)是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。廣州外泌體miRNA測(cè)序

外泌體可以由體內(nèi)或體外培養(yǎng)的幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞分泌,并廣fan存在于血漿、膽汁、尿液、母乳、唾液、胸腔積液、淋巴、胃酸、支氣管肺泡灌洗液、腦脊液、眼淚、滑膜液、羊水、腹水、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中。目前,基于不同的分離原理,研究者建立了五種主要的提取純化技術(shù),分別為基于質(zhì)量密度的超速離心技術(shù)、基于粒徑大小的分離技術(shù)、基于溶解性質(zhì)的聚合物沉淀技術(shù)、基于免疫親和原理的分離技術(shù)和基于流體性質(zhì)的微流控技術(shù)。廣州外泌體miRNA測(cè)序