血液外泌體融合實(shí)驗(yàn)

外泌體（exosome）是一種由活細(xì)胞分泌的，直徑約為40～160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。它攜帶了分泌細(xì)胞包含的生物活性物質(zhì)，如DNA、miRNAs、mRNA、長(zhǎng)鏈非編碼RNA（LncRNA）、酶、蛋白質(zhì)和細(xì)胞代謝物等。外泌體在細(xì)胞間通信中扮演著十分重要的角色。目前對(duì)于外泌體的研究涉及包括瘤的發(fā)生和發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制、瘤診斷標(biāo)志物以及藥物傳遞系統(tǒng)等諸多方面。外泌體是一個(gè)高度異質(zhì)性的群體，具有獨(dú)特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對(duì)受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來區(qū)分。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性。外泌體具有良好的生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性，使其在藥物遞送方向大有潛力。血液外泌體融合實(shí)驗(yàn)

外泌體作為疾病診斷的標(biāo)志物具有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì):(1)與正常細(xì)胞相比，病變細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在分泌量和內(nèi)容物方面存在明顯差異。病變的細(xì)胞和組織能夠產(chǎn)生更多外泌體。(2)由于特殊的生成方式，外泌體的組成不同于來源細(xì)胞。其內(nèi)包含的一些特異性蛋白質(zhì)能夠揭示外泌體的起源、結(jié)構(gòu)和運(yùn)輸方式，有利于深入了解外泌體的產(chǎn)生機(jī)制。(3)病變細(xì)胞分泌的外泌體通過胞吐的過程進(jìn)入血液、尿液等體液，囊泡狀結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)外泌體內(nèi)部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干擾，有利于保持其結(jié)構(gòu)完整和生物活性，通過對(duì)此類體液進(jìn)行分析可以實(shí)現(xiàn)疾病的無創(chuàng)或微創(chuàng)檢測(cè)。外泌體試劑盒提取隨著外泌體的功能逐漸被發(fā)現(xiàn)，近年來，應(yīng)用這些功能的醫(yī)治法也在被開發(fā)出來。

隨著科學(xué)研究的不斷深入，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體是由通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，多泡內(nèi)涵體再與細(xì)胞膜融合后，釋放到細(xì)胞外基質(zhì)中的一種直徑約30~120nm的膜性囊泡。外泌體介導(dǎo)瘤細(xì)胞的化療抵抗。在瘤的治理過程中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)藥物耐受的情況，這會(huì)導(dǎo)致化療失敗，在這和過程中外泌體以多種途徑參與了化療抵抗這一過程。通常，發(fā)生EMT過程的瘤細(xì)胞可獲得抵抗凋亡能力，而抵抗凋亡通常使瘤表現(xiàn)為化療抵抗。瘤細(xì)胞來源的外泌體能通過傳遞相關(guān)的組織因子(如VEGF、TGF2β)介導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT，從而增加瘤細(xì)胞的化療抵抗能力。

外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn)，NY-ESO-1是單獨(dú)對(duì)低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA，其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。突狀細(xì)胞釋放的外泌體可以強(qiáng)化殺傷性T細(xì)胞對(duì)癥狀細(xì)胞的特異性反應(yīng)。

要使外泌體在臨床上得以更加廣fan的應(yīng)用，仍然需要更加深入的研究:(1)外泌體的提純方式主要是超速離心，這種提純方式效率較低，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)并且相對(duì)昂貴，并不適宜在臨床上應(yīng)用。(2)外泌體雖然具有一定的靶向性，但這種靶向性較弱，不足以解決中流的靶向zhiliao問題。通過在外泌體表面表達(dá)特異性肽的方法可以為上述問題的解決提供較為有效的途徑。(3)在外泌體的載藥fang式方面，現(xiàn)在常用的電穿孔法雖更具優(yōu)勢(shì)，但往往會(huì)對(duì)外泌體或藥物的完整性產(chǎn)生影響，轉(zhuǎn)染外泌體法不能保證基因類藥物全部進(jìn)入外泌體內(nèi)而不是粘附在外泌體表面，存在著安全隱患。(4)外泌體作為細(xì)胞分泌物質(zhì)，其本身可調(diào)性并不如脂質(zhì)體以及聚合物基藥物載體。外泌體是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。浙江外泌體熒光標(biāo)記

外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測(cè)和監(jiān)測(cè)提供了一個(gè)多指標(biāo)的診斷窗口。血液外泌體融合實(shí)驗(yàn)

血清和血漿為常規(guī)檢測(cè)樣本，具有微創(chuàng)取樣的優(yōu)點(diǎn)，是診斷疾病的理想樣本。血液中外泌體能夠作為胰腺ai、胃ai、肺ai和阿爾茲海默等疾病的早期診斷和療效評(píng)價(jià)提供潛在標(biāo)志物。血液外泌體來源的疾病標(biāo)志物主要包括蛋白質(zhì)和miRNA兩類。Melo等發(fā)現(xiàn)利用胰腺ai細(xì)胞外泌體表面的磷脂酰肌醇聚糖-1(GPC1)能夠?qū)崿F(xiàn)胰腺ai早期診斷，利用該方法對(duì)血清中包含GPC1的外泌體進(jìn)行檢測(cè)，能夠高特異性(100%)、高靈敏度(100%)地區(qū)分胰腺ai患者(246例)和正常人(20例)以及慢性胰腺炎患者(37例)。血液外泌體融合實(shí)驗(yàn)