細胞上清外泌體提取試劑盒原理

外泌體運輸的基因類藥物也可以是miRNA，miRNA是一類非編碼的內源性RNA，主要用于調節(jié)轉錄后的基因表達。miRNA主要通過與mRNA的未翻譯的區(qū)域(UTRs)結合起到抑制基因表達和降解mRNA的作用。與siRNA不同，miRNA抑制mRNA的表達不需要完美的堿基配對，因此每種miRNA可以抑制多種蛋白質的表達，而每種siRNA只針對一種蛋白質。miRNA的運載也存在著種種挑戰(zhàn):miRNA體內穩(wěn)定性差、生物分布不理想、易被體內酶降解以及容易引起副反應等。越來越多的研究表明外泌體也是體內運載miRNA的優(yōu)良載體，并且利用外泌體運輸miRNA的zhiliao方法已經在許多疾病模型中得以應用。外泌體被包裹在堅硬的雙層膜中，雙層膜保護外泌體的內容物，使外泌體能夠在組織中長距離移動。細胞上清外泌體提取試劑盒原理

在運輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經在臨床上使用的未成熟的樹突細胞作為母代細胞，通過化學轉染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結合，使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經靶向性處理的外泌體用DiR染料標記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細胞的小鼠體內，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經出現(xiàn)在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達中流組織處，說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。細胞上清外泌體提取試劑盒原理外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。

膜封閉的囊泡釋放到周圍環(huán)境中已經成為近幾年來越來越受關注的問題。令人信服的證據表明囊泡可交換復雜的信息有助于這種興趣的興起。但是，也已經清楚，不同類型的分泌囊泡共存，具有不同的細胞內起源和形成模式，因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型。它們在真核細胞內的多泡小體中形成，并且當這些多泡小體與質膜融合時分泌到細胞外。有趣的是，不同的分子家族已被證明參與細胞內形成外泌體及其隨后的分泌，這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型。

各種細胞粘著分子在外泌體膜表面表達，由其決定外泌體被運輸往哪一種細胞，期望開發(fā)利用該特征的新型DDS。外泌體在體液中十分穩(wěn)定，同時外囊泡所含的蛋白質和RNA被外泌體的脂質雙層膜所包被也不會分解。另外在從體液中提取外泌體后，體液可長期穩(wěn)定保存，因此外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標記。外泌體與各種疾病的相關性被檢測出，特別是血液中釋放的病細胞來源的外泌體，其與正常細胞來源外泌體在結構分子上的差異倍受矚目，并作為癥狀早期診斷技術，應用于與癥狀進展相關的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟、前列腺疾病、膀胱疾病的新型診斷標記，髓液中的外泌體作為腦內種瘤和神經退行性疾病的新型標記物。實際上，用PS親和法提取的人白血病細胞釋放的外泌體。

外泌體調控毛發(fā)根部的囊干細胞的機能，延長毛發(fā)根部的囊生長期，同時活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊，使其提前進入新的生長周期，實現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長。骨衰老小鼠注射外泌體試驗證明：年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機。來源于脂肪組織中的干細胞分泌一些信號分子和生長因子，可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長周期的毛發(fā)根部的囊干細胞進行分化，向上遷移生成表皮細胞和皮脂腺，向下遷移生成毛母細胞。毛發(fā)根部的囊的生長周期決定毛發(fā)的生長周期，而毛發(fā)根部的囊干細胞的機能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度，外泌體靶向調控毛發(fā)根部的囊干細胞的功能。近些年關于外泌體研究很普遍。安徽外泌體miRNA芯片

類風濕關節(jié)炎患者的滑膜成纖維細胞所釋放的外泌體。細胞上清外泌體提取試劑盒原理

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據密度梯度構建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據顆粒的沉降速率分離,介質密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會根據樣品液中各種溶質成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會沉淀到底部。細胞上清外泌體提取試劑盒原理