湖南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒，是根據(jù)外泌體表面由類似于細胞膜的脂質(zhì)雙分子層具有一定疏水性這一特性，用試劑捆綁水分子，從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對設(shè)備要求低，但與差速離心方法類似，其分離得到的沉淀包含其他細胞分泌的囊泡，且血清中含有大量血清蛋白分子，成分復(fù)雜，很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質(zhì)。Sabapatha等曾根據(jù)來源于胎盤的外泌體表面特異表達這一特性，使用耦合到磁珠的抗抗體，采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少，不適用于大規(guī)模提取制備，且免疫磁珠價格昂貴，不利于提取技術(shù)的普及。利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運輸?shù)侥繕思毎?。湖南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

外泌體（exosome）是一種由活細胞分泌的，直徑約為40～160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。它攜帶了分泌細胞包含的生物活性物質(zhì)，如DNA、miRNAs、mRNA、長鏈非編碼RNA（LncRNA）、酶、蛋白質(zhì)和細胞代謝物等。外泌體在細胞間通信中扮演著十分重要的角色。目前對于外泌體的研究涉及包括瘤的發(fā)生和發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移機制、瘤診斷標志物以及藥物傳遞系統(tǒng)等諸多方面。外泌體是一個高度異質(zhì)性的群體，具有獨特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對受體細胞的功能影響以及細胞來源來區(qū)分。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性。江西CD63外泌體慢病毒外泌體的形成始于細胞內(nèi)陷，成熟于多囊泡胞內(nèi)體，終于膜融合。

外泌體是細胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過三種方式介導(dǎo)細胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細胞相互作用,通過受體–配體作用黏附到靶細胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細胞內(nèi),從而激huo靶細胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細胞的細胞表面受體結(jié)合,從而激huo靶細胞;(3)外泌體還可以與靶細胞直接接觸發(fā)生膜融合,導(dǎo)致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉(zhuǎn)移到目標細胞,從而引起靶細胞的響應(yīng)。通過介導(dǎo)細胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細胞或髓樣細胞以抑制免疫反應(yīng),而且還可以參與疾病形成的病理過程,如通過與受體細胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進中流轉(zhuǎn)移過程中的血管生長和中流細胞遷移。

外泌體本身的惰性相當(dāng)高，但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學(xué)功能，因此，外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質(zhì)的天然載體也引起了藥物遞送領(lǐng)域的極大興趣，因為它可以利用這些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破，要將其用于臨床治理，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先，對外泌體的具體合成機制、功能了解并不是非常詳細。其次，現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟有效的外泌體分離技術(shù)。免疫印跡法（WB）和Elisa檢測法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測的一般方法。

雖然系統(tǒng)遞送的外泌體主要在肝臟、腎臟和脾臟中積累，但通過在外泌體的外表面上展示特定的靶向分子。例如，識別靶抗原的肽或抗體片段，可以獲得靶向外泌體；通過在細胞分泌囊泡上展示糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定的納米抗體，可以使細胞分泌囊泡顯示多種蛋白，包括抗體、熒光蛋白和信號分子。自然分泌的外泌體分離純化直接作為藥物的潛力有限，但是，將自然的外泌體分泌所需組分摻入合成脂質(zhì)體或納米顆粒中，并且使用可控程序組裝后的工程化外泌體模擬物在藥學(xué)上擁有更大的應(yīng)用潛力。利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。江西CD63外泌體慢病毒

外泌體具有良好的生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性，使其在藥物遞送方向大有潛力。湖南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

細胞分泌外泌體的過程一般分為三個階段:(1)質(zhì)膜內(nèi)陷,形成早期內(nèi)吞小泡;(2)內(nèi)吞小泡向內(nèi)萌發(fā)成熟,形成多囊泡體;(3)多囊泡體與質(zhì)膜融合,并釋放出囊泡內(nèi)容物,形成外泌體。外泌體具有獨特的理化性質(zhì),其密度為1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的雙層脂膜所包裹,具有典型杯狀形態(tài),呈現(xiàn)為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈,其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構(gòu)成,另有與細胞來源相關(guān)的部分特殊脂類。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子,其中主要為蛋白質(zhì),且大部分蛋白為所有來源外泌體所共有,只有小部分與其來源有關(guān),為其分泌細胞的特有蛋白,能夠反映分泌細胞的類型和生理病理狀態(tài)。除此之外,外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸,并將其運輸?shù)桨屑毎?發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。湖南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

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