植物外泌體miRNA測序

外泌體中存在著某些特定的蛋白質、脂質和多糖,基于抗原–抗體特異性識別和結合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質,其結果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標志物的表達,也可以瞬時讀出外泌體的產量和特異性。磁珠法多使用共價包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產率。外泌體在組織修復領域均起著重要的作用，并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng)。植物外泌體miRNA測序

在運輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經在臨床上使用的未成熟的樹突細胞作為母代細胞，通過化學轉染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結合，使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經靶向性處理的外泌體用DiR染料標記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細胞的小鼠體內，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經出現在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達中流組織處，說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。鼻腔灌洗液外泌體測序利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運輸到目標細胞中。

與PC-3細胞相比，PC-3細胞外泌體中含有較高豐度的鞘糖脂、鞘磷脂、膽固醇和磷脂酰絲氨酸。外泌體常見的表面蛋白質包括四跨膜蛋白(如CD63、CD9、CD81)、黏附蛋白(如L1CAM、LAMP2)、整合素和糖蛋白(如纖連蛋白)等，而外泌體囊泡內蛋白質則與來源細胞內的蛋白質密切相關，包含例如熱休克蛋白(HSP70、HSP90)和細胞骨架蛋白(actin、tubulin、cofilin)等。除此之外，外泌體中還攜帶有來源細胞的miRNAs、mRNAs、non-codingRNAs、circularRNAs和DNA等遺傳物質。外泌體的完整囊泡結構能夠保護其內部生物分子不受體液中各種酶的影響從而保持其完整性和生物活性。

外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙，快速直達基底層起效；富含100+多種胞外基質蛋白、胞外基質酶以及細胞黏附分子；能夠有效促進皮膚成纖維細胞（HDFs）中I型膠原蛋白、成纖維蛋白，促進皮膚有效快速再生（Rejuvenation）；能夠有效促進皮膚成纖維細胞（HDFs）彈性蛋白生成，保持皮膚飽滿和彈性；有效降低皮膚成纖維細胞（HDFs）中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質中IIIIII型膠原蛋白被降解；富含活性物質能夠促進皮膚有些血管的修復與重建再生。外泌體本身的惰性相當高，但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學功能。

外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結構,其穩(wěn)定性較好,可保護內部生物分子免受體液中各種酶的影響,從而保持其完整性和生物活性。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液。目前,常用的儲存方法為冷凍保存,但是冷凍保存可能會導致外泌體形狀與物理性質的改變,也可能導致多層囊泡的形成和聚集,反復凍融會導致外泌體表面分子的生物特性、含量和標志物組成發(fā)生變化。血清中包含外泌體在內的細胞外囊泡DNA在不同儲存環(huán)境可保持穩(wěn)定,血漿存放于4°C時其RNA會明顯降解,在–20°C下長期保存也會導致血漿中外泌體總RNA降解,但miRNA卻十分穩(wěn)定,這也提示了外泌體miRNA作為生物標志物的潛力。外泌體的膜同細胞一樣，是磷脂雙分子層。血漿血清外泌體提取試劑盒方法

外泌體與各種疾病的相關性被檢測出，特別是血液中釋放的病細胞來源的外泌體。植物外泌體miRNA測序

研究者利用電穿孔法對外泌體進行DOX的負載，進行體內抗中流效果的研究。實驗結果顯示，負載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對中流的抑制效果遠優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX，其不僅水溶性低，而且容易使DOX與血液中的蛋白結合，從而被網狀內皮系統(tǒng)識別捕獲，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護DOX，可以提高DOX水溶性，避免被網狀內皮系統(tǒng)捕捉，提高靶向性，從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。植物外泌體miRNA測序

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