外泌體lncRNA測序

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；參與細(xì)胞之間的交流，物質(zhì)的運(yùn)輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。對分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或示蹤，有助于對外泌體的功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。目前對于外泌體的標(biāo)記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標(biāo)記在兔紅細(xì)胞上的PKH26半衰期長達(dá)100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究。外泌體的提取的方式：免疫磁珠法。外泌體lncRNA測序

外泌體作為疾病診斷的標(biāo)志物具有其獨(dú)特優(yōu)勢:(1)與正常細(xì)胞相比，病變細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在分泌量和內(nèi)容物方面存在明顯差異。病變的細(xì)胞和組織能夠產(chǎn)生更多外泌體。(2)由于特殊的生成方式，外泌體的組成不同于來源細(xì)胞。其內(nèi)包含的一些特異性蛋白質(zhì)能夠揭示外泌體的起源、結(jié)構(gòu)和運(yùn)輸方式，有利于深入了解外泌體的產(chǎn)生機(jī)制。(3)病變細(xì)胞分泌的外泌體通過胞吐的過程進(jìn)入血液、尿液等體液，囊泡狀結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)外泌體內(nèi)部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干擾，有利于保持其結(jié)構(gòu)完整和生物活性，通過對此類體液進(jìn)行分析可以實(shí)現(xiàn)疾病的無創(chuàng)或微創(chuàng)檢測。細(xì)菌外泌體提取試劑盒原理抗體親和法和密度梯度離心法，雖然可以提取到高純度的外泌體，但不能提取完整外泌體。

外泌體可以調(diào)控星狀細(xì)胞（HSC）活化，并參與HSC細(xì)胞遷移的進(jìn)程。活化的HSC來源的外泌體中，CCN2表達(dá)升高，Twist1和miR-214表達(dá)被抑制，這些外泌體還能誘導(dǎo)靜止的HSC細(xì)胞表達(dá)CCN2。此外，Twist1可以誘導(dǎo)miR-214表達(dá)從而抑制CCN2的表達(dá)。CCL4處理的外泌體和外泌體SK1/S1P會誘導(dǎo)HSC遷移。MSC分泌的外泌體可以有效減緩肝纖維化過程，這可能成為肝纖維化治理的靶點(diǎn)。研究顯示，CP-MSC來源的外泌體miR-125b可以抑制Hedgehog信號通路的活化，抑制纖維化；而HUC-MSC分泌的外泌體可以逆轉(zhuǎn)細(xì)胞形態(tài)和TGF-β1誘導(dǎo)的EMT進(jìn)程，減弱肝纖維化。

外泌體大小不均可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷，導(dǎo)致流體和固體的總含量不同；細(xì)胞的微環(huán)境和固有的生物學(xué)特性可能會影響外顯體的含量及其生物學(xué)標(biāo)記，如乳腺病細(xì)胞及其外泌體的蛋白質(zhì)組可以顯示來源細(xì)胞是上皮樣細(xì)胞還是間充質(zhì)樣細(xì)胞；由于細(xì)胞表面受體表達(dá)的不同，外泌體對受體細(xì)胞的影響可能不同，可能誘導(dǎo)細(xì)胞存活，也可能誘導(dǎo)凋亡，或誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)等；異質(zhì)性也可以基于外泌體起源的組織，包括它們是否來自病細(xì)胞，瘤細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體傳遞致瘤miRNAs明顯促進(jìn)瘤細(xì)胞增殖。神經(jīng)細(xì)胞來源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的分子。

外泌體的提取方法：超速離心法，這是外泌體提取比較常用的方法。超速離心法得到的外泌的體量比較多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡而不是外泌體。過濾離心法，這種操作簡單、省時，不會影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期的準(zhǔn)備工作繁雜，比較耗時，量少。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。外泌體綜述

各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá)，由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞。外泌體lncRNA測序

除運(yùn)輸藥物進(jìn)行疾病zhiliao之外，外泌體還能進(jìn)行免疫zhiliao，外泌體免疫zhiliao和載藥zhiliao。進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)時，外泌體通常運(yùn)載TGF-β1、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)或MAGE抗原等物質(zhì)。在這些研究中，分泌外泌體的母代細(xì)胞往往選用具有很好抗原遞呈(antigenpresentation)能力的樹突細(xì)胞或者中流細(xì)胞。Cao等采用鼠B淋巴瘤細(xì)胞作為母代細(xì)胞，通過熱處理的方式使淋巴瘤細(xì)胞分泌的外泌體含有更多的熱休克蛋白(HSP60和HSP90)和其他一些刺激免疫的分子，如主要組織相容性復(fù)合物(MHC-I和MHC[1]II)以及CD40、CD86等，與未熱處理的鼠B淋巴瘤細(xì)胞分泌的外泌體相比，熱處理后分泌的外泌體可以增強(qiáng)對T細(xì)胞的激huo能力，從而增強(qiáng)這種基于外泌體的疫苗的抗中流能力。外泌體lncRNA測序

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