海洋生物外泌體Dil

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體，是具有生物活性的脂雙層囊泡，大小約為30-100nm，由不同類型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用，并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng)。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。外泌體貨物的組成非常多樣化，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞受體、脂質(zhì)以及不同的核酸，如miRNA和環(huán)狀RNA。外泌體可以通過多種方法給藥，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。海洋生物外泌體Dil

外泌體的提取、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細(xì)胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。腦脊液提取試劑盒服務(wù)外泌體的遺傳分子與肝臟病理息息相關(guān)，在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點或分子標(biāo)志物。

外泌體的生物發(fā)生和鑒定。液體和細(xì)胞外成分，如蛋白質(zhì)、脂類、代謝物、小分子和離子，可以通過內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷，與細(xì)胞表面蛋白一起進(jìn)入細(xì)胞。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向。這一出芽過程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合。ESEs也可以與ER和TGN融合，這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達(dá)它們的。因此，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。

微流控芯片是一種可兼容多種外泌體分離方法的新興檢測平臺,這些方法包括免疫親和分離、膜過濾、納米線捕獲、聲納米過濾和確定性側(cè)向位移分選等。微流控裝置是由幾十到幾百微米的不同直徑微通道網(wǎng)絡(luò)組成的緊湊單元,能夠處理皮升到微升范圍內(nèi)的黏性介質(zhì)樣品;且根據(jù)特定的功能,微通道可以相互連接,使用額外的特定裝置來微調(diào)流體運(yùn)動。微流控技術(shù)能夠以極高的準(zhǔn)確性和特異性在微尺度上重現(xiàn)眾多實驗室過程,取代昂貴的設(shè)備,基于微流控技術(shù)的電化學(xué)外泌體檢測芯片已經(jīng)受到廣fan關(guān)注。日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。

外泌體特指直徑在30-150nm的囊泡，其主要來源于細(xì)胞內(nèi)多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9）、熱休克蛋白家族（HSP60,HSP70和HSP90），本示蹤病毒使用CD63作為生物標(biāo)記，通過將CD63與熒光蛋白偶聯(lián)，帶熒光的膜蛋白會在表達(dá)至外泌體膜上，便于后續(xù)進(jìn)行、觀察內(nèi)化或其他實驗。慢病毒載體的構(gòu)建原理就是將HIV21基因組中的順式作用元件(如包裝信號、長末端重復(fù)序列)和編碼反式作用蛋白的序列進(jìn)行分離。臨床前研究的證據(jù)表明干細(xì)胞釋放的外泌體可作為心肌修復(fù)的潛在無細(xì)胞治理劑。海洋生物外泌體lncRNA芯片

疾病的進(jìn)展和對診療的反應(yīng)可以通過外泌體的多組分分析來確定。海洋生物外泌體Dil

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過將無水聚合物，如聚乙二醇（PEG），與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結(jié)合水分子，增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體，然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速，簡便，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設(shè)定。然而，這種方法缺乏選擇性，PEG聚合物不只會導(dǎo)致外泌體小泡沉淀，還會引起其他細(xì)胞外囊泡、細(xì)胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀。因此，在使用這種方法之前，必須進(jìn)行樣品預(yù)處理，例如過濾或超速離心，以減少較終的外泌體制劑的污染。海洋生物外泌體Dil

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