外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,應(yīng)選用血漿還是血清?答:血清是血液凝固之后收集的液體,所以其中少了纖維蛋白原,凝血因子,以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一。羊奶提取試劑盒公司
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。浙江外泌體脂質(zhì)組學(xué)外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)。
被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達譜,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取,進而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測肉瘤轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。
外泌體的提取分離方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心:在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。
外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障(如細胞質(zhì)膜和血/腦屏障)的能力。這使它們成為理想的診療傳遞分子。外泌體由于其天然的材料運輸特性,固有的長期循環(huán)能力和出色的生物相容性而具有比較大的潛力成為藥物遞送載體,其適合于遞送各種化學(xué)物質(zhì),蛋白質(zhì),核酸和基因診療劑。(1)外泌體作為小分子的藥物傳遞載體:關(guān)于外泌體遞送姜黃素,多巴胺,PTX和DOX等化學(xué)診療藥物的報道已有充分文獻記載。(2)外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體:已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體可遞送多種蛋白質(zhì),例如酶,細胞骨架蛋白質(zhì)和跨膜蛋白質(zhì)。(3)外泌體作為核酸的藥物遞送載體:研究表明,外泌體天然的可以攜帶遺傳(例如miRNA,siRNA)到靶細胞中,從而在生物學(xué)和致病過程中誘導(dǎo)遺傳修飾。外泌體的這些特征已成為涉及遺傳療法和使用外泌體進行研究的主要策略。外泌體的直徑比微泡的要小,后者直徑為100nm-1μm。吉林外泌體PKH26
外泌體可以通過多種方法給藥,靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。羊奶提取試劑盒公司
外泌體生物學(xué)功能:1、在心血管系統(tǒng)中,據(jù)報道,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質(zhì)干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制;3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中,外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動,從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機理;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細胞結(jié)合的途徑。然而,比較明顯,其結(jié)合過程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開始。膜受體的識別是外泌體細胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細胞中。羊奶提取試劑盒公司
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