外泌體細(xì)胞培養(yǎng)

外泌體為細(xì)胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領(lǐng)域。外泌體還顯示出了在診療各種疾病（如心肌病和神經(jīng)?。┓矫娴臐摿?。但是，在實(shí)際應(yīng)用外泌體之前，需要使用大型動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床試驗(yàn)。同時(shí)需要開(kāi)發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術(shù)和策略。另外，在研究和評(píng)估外泌體的副作用和功效時(shí)，必須考慮到肉瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體可能增強(qiáng)肉瘤生長(zhǎng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)。外泌體給藥途徑：給藥途徑是獲得所需功效的重要參數(shù)。外泌體可以通過(guò)多種方法給藥，但是，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。通過(guò)利用增強(qiáng)通透性和保留（EPR）效應(yīng)，在荷瘤動(dòng)物中靜脈內(nèi)遞送外來(lái)體似乎是有用的。在某些容易達(dá)到肉瘤部位的不同惡性肉瘤中，外泌體療法的給藥途徑是瘤內(nèi)注射。在疾病部位直接注射外泌體的優(yōu)點(diǎn)是可以特異性地運(yùn)送裝載的藥物。另外口服給藥，腹腔給藥，皮內(nèi)給藥和鼻內(nèi)給藥途徑已成功用于外泌體遞送。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。外泌體細(xì)胞培養(yǎng)

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過(guò)將無(wú)水聚合物，如聚乙二醇（PEG），與樣品混合來(lái)沉淀外泌體。PEG聚合物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合水分子，增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體，然后通過(guò)離心分離外泌體。這種分離的方法快速，簡(jiǎn)便，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設(shè)定。然而，這種方法缺乏選擇性，PEG聚合物不只會(huì)導(dǎo)致外泌體小泡沉淀，還會(huì)引起其他細(xì)胞外囊泡、細(xì)胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀。因此，在使用這種方法之前，必須進(jìn)行樣品預(yù)處理，例如過(guò)濾或超速離心，以減少較終的外泌體制劑的污染。廣州外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)外泌體在免疫調(diào)控、肉瘤轉(zhuǎn)移和血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域發(fā)揮著非常重要的作用。

近年來(lái)，外泌體的捕獲技術(shù)越來(lái)越多，微流體系也被用于外泌體提取，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高，且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè)。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面，并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜，所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度。另外，樣品量的注入速率比較低，因此，對(duì)于大樣品量，將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前，研究人員已開(kāi)發(fā)了多種方法來(lái)分離外泌體，離心技術(shù)仍然是常用方法，其他方法，例如過(guò)濾、磁珠分離和色譜法等，也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但目前仍然沒(méi)有一種公認(rèn)有效的提取方法，研究人員應(yīng)針對(duì)不同來(lái)源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體，主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等，存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來(lái)越多的研究證實(shí)，外泌體可以通過(guò)細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì)，發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用。對(duì)外泌體的分析和檢測(cè)可以輔助疾病的早期診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后分析。外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體的直徑比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道，并且通過(guò)生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。疾病的進(jìn)展和對(duì)診療的反應(yīng)也可以通過(guò)外泌體的多組分分析來(lái)確定。外泌體提取在短時(shí)間（一周之內(nèi)）使用，可以放在4度保存，如果長(zhǎng)時(shí)間保存可以放在-20度或-80度保存。外泌體膠原蛋白

外泌體作為核酸的藥物遞送載體。外泌體細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞攝取診療性外泌體：從樹(shù)突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對(duì)靶細(xì)胞的影響可能是通過(guò)不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來(lái)控制的。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中。外泌體細(xì)胞培養(yǎng)

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