HE染色組織樣本水化:將浸泡過(guò)二甲苯的待測(cè)組織樣本先放入無(wú)水乙醇中浸泡5min,使脫蠟時(shí)用的二甲苯可以被洗脫出去,使水可以進(jìn)入組織中;再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡5min以達(dá)到充分水化的效果。組織切片蘇木素染色、分化與反藍(lán):將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗,每次浸泡5min,總共清洗3次。之后用移液***吸取已經(jīng)預(yù)先配制好的蘇木素染色液,每個(gè)組織切片滴加100ul,充分染色10min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進(jìn)行分化,使細(xì)胞核中結(jié)合過(guò)多的染液和細(xì)胞漿中的多余的染液被除去。分化完成后,再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。為了使蘇木素染藍(lán)色,使用弱堿性的促藍(lán)液加入組織切片中,讓細(xì)胞核染藍(lán)色。反藍(lán)結(jié)束后先用清水進(jìn)行清洗,再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。HE染色過(guò)程中常見(jiàn)的問(wèn)題以及應(yīng)對(duì)方法。河北靠譜的HE染色分析
HE染色全名蘇木精—伊紅染色法,屬于化學(xué)染色法,其主要依靠蘇木精染液為堿性,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。實(shí)驗(yàn)過(guò)程:1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自來(lái)水洗。2、蘇木素染色:切片入蘇木素染液染3-5min,自來(lái)水洗,分化液分化,自來(lái)水洗,返藍(lán)液返藍(lán),流水沖洗。3、伊紅染色:切片依次入85%、95%的梯度酒精脫水各5min,入伊紅染液中染色5min。4、脫水封片:切片依次放入無(wú)水乙醇I5min-無(wú)水乙醇II5min-無(wú)水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性樹(shù)膠封片。5、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。結(jié)果判讀:細(xì)胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈紅色遼寧結(jié)果客觀的HE染色外包HE染色,南京英瀚斯,專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)外包公司。
HE染色法,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。去氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中稱(chēng)藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合使胞漿染色,細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后,細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán),如處理適宜,可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。
HE染色切片中出現(xiàn)類(lèi)似色素樣的點(diǎn)狀結(jié)晶和黑色光滑的細(xì)胞核原因:切片封片前放置在空氣中時(shí)間太長(zhǎng),以至于二甲苯揮發(fā)切片干燥所致。對(duì)策:移去組織切片上的蓋玻片和封固劑,重新處理。將切片水洗數(shù)分鐘,然后重新脫水、透明、封固。封片過(guò)程中要保持組織切片的輕度濕潤(rùn),盡量不要讓其干燥。細(xì)胞核呈紅、棕色改變?cè)颍禾K木精染色液過(guò)度氧化和切片在蘇木精染液染色后返藍(lán)不足。對(duì)策:首先,每次染色之前檢查蘇木精染色液的染色能力,發(fā)現(xiàn)氧化過(guò)度應(yīng)及時(shí)更換。其次,可用流水、溫水或弱堿性溶液如稀氨水、0.2%碳酸氫鈉等,在蘇木精染色后,給切片以足夠的藍(lán)化時(shí)間。HE染色 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。
HE染色分化作用:染色后,用某些特定的溶液將組織過(guò)多結(jié)合的染色劑脫去,這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為分化作用,所用的溶液稱(chēng)為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu),使組織與色素分離而褪色。經(jīng)蘇木精染色后,必須用0.5%鹽酸乙醇分化,使細(xì)胞核過(guò)多結(jié)合的蘇木精染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木精染料脫去,在進(jìn)行伊紅染色,才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明。因此,在HE染色中分化是極為關(guān)鍵的一步。返藍(lán)作用:分化之后,蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),呈紅色,在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色,故分化之后,立即用水出去組織切片上的酸而終止分化,再用弱堿性水(0.2%氨水)使蘇木精染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色,這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán),但所需時(shí)間較長(zhǎng)。HE染色是病理實(shí)驗(yàn)中比較用的一種基礎(chǔ)染色方法。山西推薦的HE染色檢測(cè)
比較常見(jiàn)的病理染色HE染色?河北靠譜的HE染色分析
HE染色伊紅著色淡分析及應(yīng)對(duì)原因:(1)伊紅染液的pH值可能大于5;(2)藍(lán)化液殘留過(guò)多;(3)切片太?。唬?)切片經(jīng)伊紅染色后在乙醇脫水時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。對(duì)策:檢查伊紅染液的pH值,如果必要的話(huà),用乙酸將其調(diào)節(jié)在4~5之間,從而使伊紅染色彩艷麗。確保每次藍(lán)化步驟完成后,使用的弱堿性溶液被充分洗去,玻片上沒(méi)有殘留的弱堿性溶液。檢查切片的厚度。脫水時(shí)不要讓切片在低濃度乙醇停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng),因?yàn)楹嗟牡蜐舛纫掖紩?huì)將伊紅的顏色分化掉。河北靠譜的HE染色分析
南京英瀚斯生物科技有限公司致力于醫(yī)藥健康,以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)***管理的追求。公司自創(chuàng)立以來(lái),投身于實(shí)驗(yàn)外包,動(dòng)物模型構(gòu)建,細(xì)胞分子實(shí)驗(yàn),病理檢測(cè),是醫(yī)藥健康的主力軍。英瀚斯生物繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長(zhǎng),又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。英瀚斯生物創(chuàng)始人俞東源,始終關(guān)注客戶(hù),創(chuàng)新科技,竭誠(chéng)為客戶(hù)提供良好的服務(wù)。