福建免疫組化推薦

來源: 發(fā)布時間:2021-11-14

實驗失敗常見問題分析有哪些:

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性?

答:這種現(xiàn)象主要是由操作不當(dāng)導(dǎo)致,可能的原因有:1.染色操作不當(dāng),致使染色失?。?.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性;3.緩沖液中有疊氮化鈉,抑制了酶的活性;4.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)?shù)取=ㄗh逐一排查,找到原因后重新進行實驗。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽性,這是為什么?答:與上一個問題類似,出現(xiàn)的原因也是試驗操作存在問題,可能的原因有:1.切片在染色過程中抗體過濃,或者干片了;使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時間過長;3.抗體溫育的時間過長等。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深,這是為什么?答:以下幾方面會導(dǎo)致切片的背景過深:1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血,造成抗體的非特異性反應(yīng);2.內(nèi)源性過氧化酶沒有完全阻斷,顯色過程中過氧化酶與酶底物反應(yīng),造成背景;3.底物呈色反應(yīng)時間過長或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底。 免疫組化失敗的原因?福建免疫組化推薦

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免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷,英瀚斯生物為您介紹。對于反應(yīng)性增生還是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時,濾泡反應(yīng)中心的細胞不表達細胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性濾泡細胞有bcl-2的高表達,bcl-2陽性。而增殖細胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通過對cancer細胞增生的程度作出評價,從而提示增生細胞的良惡性。遼寧切片免疫組化多少錢免疫組化流程是什么樣的?

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臨床應(yīng)用中,藥物靶點免疫組化,英瀚斯生物專業(yè)做實驗外包服務(wù),一站式醫(yī)學(xué)科研平臺。免疫組化及分子病理學(xué)方法在疾病診斷中只只起輔助醫(yī)療的作用,而藥物病理學(xué)是用病理學(xué)的方法確定藥物醫(yī)療的靶點、評價藥物醫(yī)療的療效、預(yù)測藥物醫(yī)療的反應(yīng),因此藥物靶點免疫組化屬“單獨的診斷”。因此對于對照的設(shè)置、質(zhì)量的控制均需要更高的要求,如對試劑的要求,不同于一般的診斷試劑,應(yīng)按對藥物管理的要求操作。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫(yī)生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫(yī)療的依據(jù)。

免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色? 

(1)縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。

(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。

(3)內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細胞多的組織),需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色; 

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(4)非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當(dāng)增加濃度來加強封閉效果; 

(5)縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等; 

(6)適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要; 

(7)防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片,這容易增強非特異性著色。 免疫組化的樣本保存要求是什么?

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免疫組化實驗所用的抗體

免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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免疫組化常用的染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。 免疫組化怎么做?步驟方法?福建免疫組化推薦

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免疫組化指的是根據(jù)抗體與抗原特異結(jié)合的原理來檢測組織切片中的抗原(如蛋白)。immuno的詞根來自操作中所使用的抗體,而histo意味著組織。另一種類似的技術(shù)是免疫細胞化學(xué)(Immunocytochemistry,簡稱ICC)。這兩個詞大家經(jīng)?;熘?,看著好像差不多,但實際上還是有點區(qū)別。IHCvsICC對于IHC,組織是來自患者或動物,經(jīng)過冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片,封片后再處理。通過這種方法,研究人員可觀察細胞組分的定位,同時維持周圍組織的原先結(jié)構(gòu)。對于ICC,大部分細胞外基質(zhì)及其他基質(zhì)組分被去除,只剩下整個細胞來染色。ICC的來源可以是細胞懸液,來自患者或動物(如血涂片、拭子等),或在實驗室中進行的組織培養(yǎng)細胞系。 福建免疫組化推薦

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