什么是免疫組化外包

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-09-09

免疫組化在什么情況下進(jìn)行組織抗原修復(fù),抗原修復(fù)的條件是什么? 

(1)由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中,發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用,從而失去抗原性。通過抗原修復(fù),使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露,提高抗原檢測率。

(2)修復(fù)方法從強(qiáng)到弱一般分為三種,高壓修復(fù)、微波修復(fù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種(具體的可以查閱相關(guān)資料,大量的:中性的、高pH的等)。

(3)微波修復(fù),我們一般用6min*4次,效果不錯(cuò)。

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細(xì)胞屬性的判定,免疫組化也可以進(jìn)行這方面的臨床應(yīng)用。通過特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分,來判定細(xì)胞的屬性,確定cancer的來源。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記,CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽性等等。如果您需要做實(shí)驗(yàn)外包,可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。青海什么是免疫組化要多少錢英瀚斯生物,專業(yè)病理染色切片平臺,免疫組化效果好!

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免疫組化臨床應(yīng)用對“未分化”cancer的分類。未分化cancer包括cancer或肉瘤,在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer細(xì)胞的起源特征不能分類,初步區(qū)分組織學(xué)類型用非特異性抗體,在其基礎(chǔ)上再選用特異性抗體做進(jìn)一步鑒定。如分化差的cancer可顯示Vimentin或S-100蛋白,有時(shí)淋巴瘤可以表達(dá)上皮膜抗原,一些黑色素瘤表現(xiàn)出角蛋白,這同時(shí)也強(qiáng)調(diào)了在cancer診斷中應(yīng)使用一組抗體而不是單個(gè)抗體。如果您有實(shí)驗(yàn)外包的需求,可以與我們南京英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系,我們也有做免疫組化的服務(wù)!

目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹

1)免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便,所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。

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2)免疫酶標(biāo)方法免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?;驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前**常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是:定位準(zhǔn)確,對比度好,染色標(biāo)本可長期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新,其特異性和靈敏度都在不斷提高,使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。


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免疫組化的局限性,可能會有假陽性。陽性信號定位不正確即為假陽性,包括著色不勻、背景著色、邊緣效應(yīng),另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。假陽性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷?,抗體有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用,過期的抗體或者不著色,或者背景著色,形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過長,由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短,冬季孵育時(shí)間稍長;(4)操作過程中組織變干,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,產(chǎn)生假陽性;(5)3,3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長,DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色,如內(nèi)源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,使壞死組織呈較高的背景染色,在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。英瀚斯生物,組織包埋、切片、染色、免疫組化拍照、報(bào)告分析,一站式搞定!什么是免疫組化外包

免疫組化技術(shù)的原理、分類和優(yōu)點(diǎn)!什么是免疫組化外包

病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”;不管是臨床醫(yī)師,還是患者,他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化?”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進(jìn)行細(xì)胞的識別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同,通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過,由于組織固定或儲存等,會造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展,根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),則有了現(xiàn)在免疫組化的方法:不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異,抗體與被測組織中的特定抗原結(jié)合,進(jìn)而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來。如有相應(yīng)顯色,則證實(shí)可能有被測抗原;無顯色則可能無被測抗原。當(dāng)然,這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色,則容易造成“假陽性”;或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等,則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加,這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免,前者如各種顯色方法的優(yōu)化;后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開發(fā)及選擇。什么是免疫組化外包