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免疫組化的特點(diǎn):
1)特異性強(qiáng)。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí),才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
2)敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段,由于技術(shù)上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn),使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。
3)定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合。該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義的。
英瀚斯生物,自建病理平臺(tái)實(shí)驗(yàn)室,專業(yè)免疫組化。 免疫組化失敗的原因?陜西切片免疫組化檢測(cè)
免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹:
英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟:
1、SP三步法
1)石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。
2)0.3%或3%H2O2去離子水(無(wú)色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。
3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘
4)候選步驟:采用抗原修復(fù):微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次.
5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來(lái)源一致。傾去,勿洗。
6)滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過(guò)夜(比較好復(fù)溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。
7)滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
8)PBS沖洗,3分鐘×5次。
9)滴加SP(鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶),室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
10)PBS沖洗,3分鐘×5次。
11)顯色劑顯色(DAB等)。
12)自來(lái)水充分沖洗。
13)可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。
14)選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?浙江大鼠免疫組化怎么選擇病理免疫組化多少錢?
免疫組化分類中免疫酶標(biāo)方法,英瀚斯生物為您介紹。免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來(lái)的技術(shù)?;驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過(guò)光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前定位準(zhǔn)確、對(duì)比度好、染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬***法(過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶)、ABC法(卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物)、SP法(鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶)、即用型二步法(聚合物鏈接)等。
免疫組化中免疫膠體金技術(shù),英瀚斯生物小編為您說(shuō)明介紹。免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒(méi)有明顯的影響。因此,用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。英瀚斯生物免疫組化,高效高質(zhì)量出結(jié)果。
什么是免疫組化?免疫組化的原理是什么?
1、定義:用標(biāo)記的特異性抗體對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry)技術(shù)。
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2、原理:根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng),前者再用標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,通過(guò)呈色反應(yīng)或熒光來(lái)顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分,在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。 免疫組化方法步驟是什么?河南做得好的免疫組化要多少錢
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免疫組化的發(fā)展路程?在臨床病理診斷中,免疫組織化學(xué)(IHC)是一種很重要的技術(shù)和手段,從20世紀(jì)70年代開始,免疫組化技術(shù)就應(yīng)用于病理診斷,對(duì)于診斷cancer、cancer分類、判斷預(yù)后產(chǎn)生了巨大的影響,同時(shí)也擴(kuò)展了人們對(duì)于各種疾病及cancer形成過(guò)程的認(rèn)識(shí),提高了病理診斷與研究水平。但是,隨著免疫組化的廣泛應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)免疫組化技術(shù)存在一些局限性。深入研究免疫組化原理和技術(shù),必須熟悉各種抗體真陽(yáng)性反應(yīng)部位,實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化,使免疫組化在病理診斷中發(fā)揮比較大的輔助作用。如果您有免疫組化相關(guān)的實(shí)驗(yàn),可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。陜西切片免疫組化檢測(cè)