吉林生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包藍(lán)白班篩選實(shí)驗(yàn)的原理是什么？一些載體（如PUC系列質(zhì)粒）帶有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的編碼區(qū)，該編碼區(qū)中含有多克隆位點(diǎn)（MCS），可用于構(gòu)建重組子。這種載體適用于只編碼β-半乳糖苷酶C端ω片段的突變宿主細(xì)胞。因此，宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有半乳糖苷酶活性，但它們同時(shí)存在時(shí)，α片段與ω片段可通過α-互補(bǔ)形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。這樣，lacZ基因在缺少近操縱基因區(qū)段的宿主細(xì)胞與帶有完整近操縱基因區(qū)段的質(zhì)粒之間實(shí)現(xiàn)了互補(bǔ)。由α-互補(bǔ)而產(chǎn)生的LacZ+細(xì)菌在誘導(dǎo)劑IPTG（異丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在時(shí)產(chǎn)生藍(lán)色菌落。而當(dāng)外源DNA插入到質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)后，幾乎不可避免地破壞α片段的編碼，使得帶有重組質(zhì)粒的LacZ-細(xì)菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，稱為藍(lán)白斑篩選。

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