HE染色細(xì)胞漿染色原理:細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物、細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系,當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,此時酸或堿性染料不易染色。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時,大于蛋白質(zhì)的等電點pH值,表現(xiàn)酸性電離,而帶負(fù)電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現(xiàn)時胞核也被染色,核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負(fù)電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽離子)結(jié)合而使細(xì)胞漿染色,細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織,嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細(xì)胞核形成鮮明的對比。HE染色的基本原理和結(jié)果分析。天津值得信賴的HE染色公司
HE染色常見問題:Q3:細(xì)胞核染色過淺,顏色暗淡答:切片在蘇木素染液中停留過短,或蘇木素過度氧化失效,或分化時間太長。對策:重新染色。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液,每個3-5min即可,接著重新染色??梢赃m當(dāng)?shù)亟M織的嗜堿性以增強核染色,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h,自來水沖洗5-10min染色,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h,自來水沖洗10min染色。Q4:細(xì)胞核染色過深,胞漿著藍色答:切片在蘇木素染液中停留過長;或切片太厚;或分化時間太短。這種情況首先鏡下看看切片厚度(比較好厚度1-2層細(xì)胞核),要么重新染色,要么重新制片。南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。陜西性價比高的HE染色外包HE染色結(jié)果如果使用計算機分析軟件分析?
HE染色組織樣本水化:將浸泡過二甲苯的待測組織樣本先放入無水乙醇中浸泡5min,使脫蠟時用的二甲苯可以被洗脫出去,使水可以進入組織中;再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡5min以達到充分水化的效果。組織切片蘇木素染色、分化與反藍:將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗,每次浸泡5min,總共清洗3次。之后用移液***吸取已經(jīng)預(yù)先配制好的蘇木素染色液,每個組織切片滴加100ul,充分染色10min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進行分化,使細(xì)胞核中結(jié)合過多的染液和細(xì)胞漿中的多余的染液被除去。分化完成后,再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。為了使蘇木素染藍色,使用弱堿性的促藍液加入組織切片中,讓細(xì)胞核染藍色。反藍結(jié)束后先用清水進行清洗,再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。
HE染色常見問題:Q5:細(xì)胞核呈棕紅色改變答:蘇木素染液過度氧化;或蘇木素染色后反藍不足導(dǎo)致。應(yīng)該立即更換蘇木素染色液?;蛟诹鲃幼詠硭?一般自來水PH7.5-7.8),或在稀釋的氨水溶液,或在0.2%碳酸氫鈉中適當(dāng)浸泡,這些步驟均可一定程度地加強蘇木素染色后的反藍效果。Q6:伊紅染色較淡答:伊紅的PH改變了(PH可能已大于5);或反藍液體未漂洗干凈,殘留后影響胞漿嗜酸性染色;或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久。對策:檢查伊紅染色液PH,可采用乙酸調(diào)至4.6-5.0。根據(jù)以上提示,調(diào)整實驗步驟。HE染色規(guī)范化流程以及注意事項。
HE染色常見問題:切片染色不均勻,有片狀的弱著**存在答:(1)取材時組織太厚,固定過久,導(dǎo)致深部組織固定不佳,而表淺組織過度固定,而透明、脫水、浸蠟均是如此,這樣在后期染色時就會出現(xiàn)染色不均勻。應(yīng)該將厚的組織剖開固定。(2)制片過程有問題,切片厚薄不一,或者有刀痕,或組織與玻片間存在氣泡。同一張切片厚薄不一,一般都是在制片時,刀片固定不佳或刀片鈍或刀片與組織角度不佳(一般比較好角度為5°)(3)脫蠟前未烘烤,脫蠟時間過短或脫蠟液使用過久,導(dǎo)致脫蠟不徹底。(4)染色液過少,著色不均勻;或染色時部分組織干涸而另一部分濕潤,這樣會導(dǎo)致組織吸附染料的能力不一。(5)分化不當(dāng)。南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。HE染色需要哪些材料及實驗步驟。青??孔V的HE染色多少錢
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HE染色觀察肝臟HE染色切片,首先要在顯微鏡下找到肝臟的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)——肝小葉。顯微鏡首先調(diào)4倍物鏡,調(diào)準(zhǔn)焦螺旋至視野清晰,可以看到肝小葉結(jié)構(gòu)。人的肝小葉之間結(jié)締組織少,小葉分隔不明顯,但動物如豬或小鼠,其肝小葉分界非常明顯。肝小葉**有**靜脈,在橫切片上顯示為空洞。肝小葉之間為將物鏡調(diào)制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小葉結(jié)構(gòu)。肝細(xì)胞以**靜脈為中心向周圍放射狀排列,稱為肝板。一般在20倍物鏡下可以清晰看到肝細(xì)胞。20倍物鏡下,肝細(xì)胞內(nèi)染色為藍色的是細(xì)胞核,細(xì)胞核大而圓,居中,異染色質(zhì)少而著色淺,能清晰看到核仁。肝細(xì)胞胞質(zhì)豐富,多成嗜酸性,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)合成旺盛時,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)散在的嗜堿性物質(zhì)。肝細(xì)胞內(nèi)有豐富的細(xì)胞器比如溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),等等,但是在光鏡下是無法看到的,需要在電鏡下才能觀察到。當(dāng)然,肝小葉內(nèi)除了肝細(xì)胞,還有膽小管、肝血竇、肝巨噬細(xì)胞等組織形態(tài),但是在HE染色時并不容易觀察到。做肝臟HE染色切片主要目的一般都是為了觀察肝細(xì)胞形態(tài)是否完整、胞核有無增大、肝小葉形態(tài)是否完整,以檢測藥物等刺激因素對肝臟的損傷作用。天津值得信賴的HE染色公司
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