紫外-可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法原理,利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來進(jìn)行分析的一種分析儀器。主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。其工作原理為分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。本文介紹的是日立U-3010型號紫外分光光度計的使用方法。日立U-3010型號紫外分光光度計的使用1.開電源,先開U-3010電源,再啟動電腦2.點擊桌面上UV,啟動程序3.點擊method窗口,將會出現(xiàn)GeneralQuantitationinstrumentMonitorReport五個對話框,如下圖所示:4.設(shè)置(1)General對話框;(2)Quantitation對話框,如果測波長選擇wavelength,數(shù)量可選多個,比如測定:260nm,280nm,230nm,則選擇3個;如圖所示:(3)Instrument對話框,將你要測定的波長值依次輸入框內(nèi);(4)設(shè)置好后,點確定鍵5.放入空白對照。在測定時,紫外可見分光光度計受到強電磁場干擾,應(yīng)去除無線電干擾環(huán)境后,再次測量。廣西原子吸收分光光度計原理
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實驗精確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管。海南紫外可見分光分光光度計原理每天使用可見分光光度計結(jié)束后,應(yīng)仔細(xì)檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出,若有溢出必須隨時用濾紙吸干。
UV-5500(PC)型紫外可見分光光度計儀器特點和功能◆雙光束比例監(jiān)測光學(xué)系統(tǒng)◆儀器采用128*64位點陣式液晶顯示器,每屏可顯示多組數(shù)據(jù)◆能直接建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,并可用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行相關(guān)的測試◆可連續(xù)測試和存儲200組數(shù)據(jù),并可存儲200條標(biāo)準(zhǔn)曲線,用戶可根據(jù)編號方便調(diào)用,測試數(shù)據(jù)可斷電保持◆波長自動校準(zhǔn)、自動設(shè)定、偏差自我修復(fù)◆換燈免光學(xué)調(diào)試◆UV-5500PC型標(biāo)配元析公司的掃描軟件可直接完成光度測量、定量測試、定性測試、動力學(xué)測試、多波長測試、DNA/蛋白質(zhì)測試及數(shù)據(jù)圖譜的處理儀器指標(biāo)波長范圍190-1100nm光譜帶寬2nm雜散光≤◆UV-5500PC型標(biāo)配元析公司的掃描軟件可直接完成光度測量、定量測試、定性測試、動力學(xué)測試、多波長測試、DNA/蛋白質(zhì)測試及數(shù)據(jù)圖譜的處理。
雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強度和檢測器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項重要指標(biāo)。使用與維護(hù)1、若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。2、指針式儀器在未接通電源時,電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機械調(diào)零。3、比色皿使用完畢后,請立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈。分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。
在測量準(zhǔn)確性和精確度時,將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長時,測定三個測試濾光片在對應(yīng)波長(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個波長的變異系數(shù)。許多分光光度計,包括Eppendorf的所有儀器,都帶有一個特殊的功能——自檢。Eppendorf建議用戶至少每周運行一次自檢,但自動自檢的頻率可根據(jù)需要進(jìn)行設(shè)定。自檢主要檢查儀器的幾個部分。它通過測定現(xiàn)有波長的隨機誤差來校驗檢測器,通過檢查大能量、隨機誤差、基準(zhǔn)傳感器的信號和光強度來校驗光源。因為分光光度計涉及到光學(xué)、電學(xué)和結(jié)構(gòu)等,所以它需要在一定的環(huán)境中應(yīng)用。遼寧分光分光光度計原理
紫外分光光度計的檢測器利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號變成可測的電信號。廣西原子吸收分光光度計原理
在零點不受光的條件下,用零點調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點,觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。在零點不受光的條件下,用零點調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點,觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。廣西原子吸收分光光度計原理