編輯|steins來源|島津分析中心背景摘要:紫外可見分光光度計(jì)和熒光分光光度計(jì)都經(jīng)常用于樣品定量。使用紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行定量時(shí)基于朗伯比爾定律,測定的吸收值一定范圍內(nèi)與樣品濃度成正比。另一方面,利用熒光分光光度計(jì)時(shí),使用熒光強(qiáng)度。在低濃度時(shí),熒光強(qiáng)度與濃度成正比,所以,可以用于定量。本次使用紫外可見分光光度計(jì)和熒光分光光度計(jì)兩臺儀器分別測定了羅丹明B溶液。羅丹明B是用于纖維和皮革的染色的熒光物質(zhì)。關(guān)于測定結(jié)果,對兩個(gè)機(jī)種的定量、檢測下限值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性度進(jìn)行了比較,下面將進(jìn)行介紹。1紫外1羅丹明B溶液的吸光度測定使用了紫外可見分光光度計(jì)UV-260Oi測定樣品吸光度。測定條件如表1所示。將粉末狀的羅丹明B溶解在蒸餾水中,調(diào)配~5ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。羅丹明B的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光光譜如圖1所示,根據(jù)544nm的吸光度值創(chuàng)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2和圖3所示。在圖2中,用~5ug/ml的6點(diǎn)和空白樣品(蒸餾水)創(chuàng)建,得到了線性度良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線(相關(guān)系數(shù)的平方值是)。在圖3所示的低濃度區(qū)域中,噪聲的影響相對較大,導(dǎo)致線性較差。2熒光2羅丹明B溶液的熒光強(qiáng)度測定使用了熒光分光光度計(jì)RF-60O0測定了樣品熒光強(qiáng)度。測定條件如表2所示。光度計(jì)的廠家哪個(gè)好?上海元析告訴您。山東紫外可見分光光度計(jì)推薦
羅丹明B的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光光譜如圖4所示。短波長側(cè)的熒光被再次吸收,導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度變高的同時(shí)峰頂向長波長側(cè)變化。根據(jù)577nm的熒光強(qiáng)度值創(chuàng)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖5以及圖6所示。如圖5所示,在ug/ml(Abs)或更高的高濃度區(qū)域,標(biāo)準(zhǔn)曲線是彎曲的,但在圖6的低濃度區(qū)域,可獲得線性度良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。3比較結(jié)果、定量下限值來比較靈敏度與應(yīng)用報(bào)告,使用標(biāo)準(zhǔn)曲線和10次空白測定中計(jì)算得的標(biāo)準(zhǔn)偏差σ,計(jì)算出了定量下限值(10σ)和檢測下限值(3σ)。另外,采用了線性度較高的標(biāo)準(zhǔn)曲線。UV-2600i和RF-6000的定量下限值和檢測下限值如表3所示。從通過本實(shí)驗(yàn)算出的定量下限值的比可知,RF-6000的靈敏度較高,是UV-2600i的400倍以上。即使對圖3和圖6的低濃度區(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較,圖6(RF-6000)的結(jié)果中得到了離散較小的標(biāo)準(zhǔn)曲線。與對未被樣品吸收的照射光進(jìn)行檢測的吸光光度法不同,熒光光度法以零為標(biāo)準(zhǔn)檢測熒光,因此噪聲水平低,可得到較高的靈敏度。UV-2600i和RF-6000的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)的平方值與濃度范圍的關(guān)系如表4所示。另外,使用UV-2600i時(shí),低于空白以外的定量下限值的點(diǎn)除外。即使在未達(dá)到UV-2600i的定量下限值的區(qū)域(0~)。吉林可見分光光度計(jì)使用上海光度計(jì)批發(fā)多少錢?
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。分光光度計(jì)的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧?shí)驗(yàn)精確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。為了測量吸光值,分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管。
試劑盒包含一個(gè)空白濾光片、三個(gè)檢查光度的濾光片和三個(gè)校正波長的濾光片。每個(gè)濾光片的吸光值是相對空白濾光片測定的。這個(gè)試劑盒不僅能讓用戶獲得測量準(zhǔn)確性的信息,也能提供精確度的信息,包括平均值和變異系數(shù)。在測量準(zhǔn)確性和精確度時(shí),將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長時(shí),測定三個(gè)測試濾光片在對應(yīng)波長(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個(gè)波長的變異系數(shù)。許多分光光度計(jì),包括Eppendorf的所有儀器,都帶有一個(gè)特殊的功能——自檢。Eppendorf建議用戶至少每周運(yùn)行一次自檢,但自動(dòng)自檢的頻率可根據(jù)需要進(jìn)行設(shè)定。自檢主要檢查儀器的幾個(gè)部分。它通過測定現(xiàn)有波長的隨機(jī)誤差來校驗(yàn)檢測器,通過檢查大能量、隨機(jī)誤差、基準(zhǔn)傳感器的信號和光強(qiáng)度來校驗(yàn)光源。它還通過測定紫外光譜范圍內(nèi)強(qiáng)度峰值位置的精確度來確定波長的系統(tǒng)及隨機(jī)誤差。遵照這些建議來維護(hù)分光光度計(jì),那么在今后的使用過程中再也不用擔(dān)心測量結(jié)果有問題啦。光度計(jì)的制作方法難嗎?上海元析告訴您。
在大部分的樣品類型之中,分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是用來滿足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但是盡管對于小實(shí)驗(yàn)室來說,制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品的固定物來滿足各種改變需要。 適用于分布光度法(發(fā)光強(qiáng)度分布的)和分布光譜法(光譜)對LED光源和照明設(shè)備進(jìn)行測量。光度計(jì)的采購行情,貴不貴?湖北元析光度計(jì)原理
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紫外可見分光光度計(jì)是分析測試實(shí)驗(yàn)室里常見的一種分析實(shí)驗(yàn)室儀器,屬于光學(xué)儀器的一種可廣泛應(yīng)用于醫(yī)療衛(wèi)生、化學(xué)化工、環(huán)保、地質(zhì)、機(jī)械、冶金、石油、食品、生物、材料、計(jì)量科學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)等各個(gè)方面,用來進(jìn)行定性分析、純度檢查、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究等。世界首臺紫外可見分光光度計(jì)誕生于1918年的美國國家標(biāo)準(zhǔn)局,后來紫外可見分光光度計(jì)經(jīng)不斷改進(jìn),又出現(xiàn)自動(dòng)記錄、自動(dòng)打印、數(shù)字顯示、微機(jī)控制等各種類型的儀器,使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷提高,其應(yīng)用范圍也在不斷擴(kuò)大。紫外可見分光光度法從問世以來,在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展,尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上,促使紫外可見分光光度計(jì)的不斷創(chuàng)新,功能更加齊全,使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。武漢集思儀器設(shè)備有限公司,一家專注于實(shí)驗(yàn)室儀器服務(wù)的企業(yè),服務(wù)了上百家實(shí)驗(yàn)室、科研機(jī)構(gòu)以及各大高校,供多種實(shí)驗(yàn)室儀器和試劑!有實(shí)驗(yàn)室儀器采購需求的可以咨詢武漢集思儀器設(shè)備有限公司!山東紫外可見分光光度計(jì)推薦
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